缺钙培养对花生幼苗生理影响(2)
2.1 材料红皮花生（Arachis hypogaea Linn）为供试植物，选取适合生长的花生种子若干粒。2.2 实验设计选取花生种子在 15%（V/V）浓度的 H2O2消毒 30min后，浸于去离子水中，于25~30℃ 环境下过夜培养，洗净后放在滤纸上，滤纸浸在去离子水中，让花生种子一半浸于水中，一半露在空气中，于28±2℃下催芽。出芽后放入洗干净的石英砂中培养7~9天，当幼苗长出真叶后，选取长势一致的植株，去掉子叶，转移至一次性杯子中进行培养液分梯度培养。在人工气候箱进行中进行花生幼苗的初期培养，控制光照时间为 12小时，光照强度控制在500~600 mol/m2•s，温度为28℃，湿度为 70%。培养液为基础培养液。 设置三个Ca浓度处理：0，0.1和 2.0mmol/L。分别代表无 Ca，低 Ca，正常 Ca培养水平，Ca以 Ca(NO4)2提供，不同的 Ca处理之间的 NO3-浓度差异用NaNO3补充。每个处理设计 4次重复。营养液pH为 6.2（用 NaOH或 HCl调节pH），每隔两到三天更换一次营养液[5]。培养 28~30天后，用所培养得到的花生幼苗，测定和分析钙离子对花生幼苗的生理影响。
2.3 测定项目及方法
2.3.1 生物量培养液培养 28d后，用去离子水洗净植株，擦拭干净，分别称量记录新鲜幼苗的根和除根以外茎叶的重量，算出根冠比；将根茎分别于105℃杀青 30min，65℃下烘干至恒重，称量，得到干物质重量。
2.3.2 可溶性糖含量测定选用蒽酮法测定[8]，称取 1g新鲜的花生叶子，于研钵中加少许乙醚，研磨至匀浆，倒入烧杯中，用 70℃热水洗涤研钵，洗液并入烧杯中，再加蒸馏水6~8ml,放入水浴锅中加热，70~80℃加入 30min左右，冷却后一滴一滴地加入饱和中性醋酸铅，直至加入醋酸铅时不再产生沉淀，将此混合物连同残渣一并倒入20ml容量瓶中，定溶。以干燥漏斗滤于三角烧杯中，瓶中事先放入草酸钠粉末，生成草酸铅沉淀，再过滤，得到可溶性糖提取液。取上述可溶性糖提取液1ml放入试管中，加蒽酮试 5ml，沸水浴中煮沸 10min,冷却，于分光光度计（UV-7504单光束紫外-可见分光光度计）上，以波长 625nm测得吸光度。在标准曲线上查取提取液中糖的含量，然后再计算样品中含糖百分数。在分光光度计中，625nm下测量，得到各浓度下样的分光光度值，在标准曲线中找到对应的糖浓度，根据公式算出糖含量。
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