超折叠绿色荧光蛋白纳米抗体复合体结构功能学研究(3)
1.1.4 超折叠绿色荧光蛋白简介 野生型 GFP 在大肠杆菌中表达时通常会错误折叠，并且折叠效率不佳，因此在致力于GFP 在单独表达过程中能稳定折叠，且作为融合蛋白时，依然能稳定折叠的性能提高，一直具有很大的挑战性[10]。本课题所采用的一种 GFP被称为超折叠绿色荧光蛋白（sfGFP），这种GFP 变体在单独表达或者融合其他蛋白表达时，都能稳定的折叠并且发出明亮的荧光，而且在融合蛋白中能发挥良好的作用。 sfGFP相对于野生型GFP，其全部突变点为：S30R， Y39N，F64L， S65T， N105T， Y145F，I171V，A206V。sfGFP 和野生型GFP 的 X射线晶体学研究中显示，sfGFP 中 S30R突变介导了一个五元离子对的网状结构，这也解释了 sfGFP 在折叠稳定性方面有极大的提高的原因。并且对 sfGFP 分别掺入额外的突变点 Y66H，Y66W 和 T203Y 得到了蓝、青、黄等颜色的荧光蛋白，并且在大肠杆菌中与其他蛋白融合表达时都能发出明亮的荧光。 1.2 纳米抗体
.2.1 纳米抗体简介 抗体是一种能与细菌、病毒等抗原进行特异性结合的蛋白质。传统抗体是包含两对多肽链的对称结构的蛋白，其中分子量较大的一对长链，被称为重链；分子量较小的一对短链，被称为轻链。链与链之间由二硫键和非共价键等相互作用连接形成一个单体分子。 20 世纪 80 年代，Ward 等科学家在骆驼血清中的抗体中筛选到除了传统抗体之外，还有仅含两条重链的一些抗体。随后研究表明，骆驼体内的抗体仅拥有重链，缺乏轻链，因此称之为重链抗体（图 1.3B）。在进一步扩增出其可变区后得到了只有单个重链可变区组成的单域抗体，又称为 VHH抗体（图1.3C），即纳米抗体（Nanobody，Nb），纳米抗体也是最小的能发挥抗体功能的片段[11]。