1.4.2 黄瓜幼苗生理生化指标的测定
1.4.2.1 叶绿素含量的测定
1.4.2.1.1 试剂
(1)80%丙酮                (2)石英砂
(3)碳酸钙粉
1.4.2.1.2 操作步骤
称取洁净的植物叶片0.1g,剪碎后装入于盛有15mL丙酮+无水乙醇混合提取液(丙酮与无水乙醇的体积比为1:1)的小刻度试管中,塞上橡皮塞,置于38~40℃的恒温箱中浸提约3h到剪碎的叶片呈白色而溶液呈绿色为止,冷却到室温后用提取液再定容到15mL刻度处,摇匀后用分光光度计分别在波长470nm、645nm和663nm处测定并记录光密度值,通过OD值计算叶绿素含量。
1.4.2.1.3 结果计算
叶绿素a含量Ca(mg/L)=12.21A663 - 2.81 A645
叶绿素b含量Cb(mg/L)=20.13 A645 – 5.03A663
类胡萝卜素含量Cx . c(mg/L)=(1000A470 – 3.27Ca-104 Cb)/229  
叶绿体色素的含量=(色素的浓度×提取液总体积×稀释倍数)/样品鲜重
1.4.2.2 根系活力的测定
1.4.2.2.1 试剂
(1)乙酸乙酯(分析纯)    (2)次硫酸钠(Na2S2O4,分析纯),粉末。
(3)1%TTC溶液           (4)1/15 mol/L,pH7.0磷酸缓冲液。
(5)1 mol/L硫酸
1.4.2.2.2 操作步骤
(1)绘制TTC的标准曲线  取0.2mL大试管放入0.4%TTC溶液,加乙酸乙酯9.8mL,再加少量固体Na2S2O4粉末摇匀,即产生红色而不溶于水的TTF(三苯基甲腙)。此溶液浓度为TTF 80µg/mL。分别取5个10mL刻度试管,取此溶液0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL分别放入,再用乙酸乙酯定容,即得到系列标准溶液,分别含TTF20µg、40µg、80µg、120µg、160µg,在485nm波长下测定吸光度,以乙酸乙酯作参比,完成标准曲线的绘制。
(2)称取0.02g根尖样品,分别放在标号的小烧杯中,加入0.4%TTC溶液5mL、磷酸缓冲液(pH7.0)5mL,让根在溶液中充分浸没,在37℃黑暗条件下保温1~2h,此后立即取1mol/L硫酸2mL加入,以停止反应。同时再做一空白实验,先加硫酸,再加根样品,其溶液浓度、操作步骤同上,37℃黑暗条件下保温后不加硫酸。
(3)把根从溶液中取出,吸干表面的液体,置于研钵中,加3~4mL乙酸乙酯,充分研磨,以提出TTF。然后取刻度试管将红色提取液移入,再用少许乙酸乙酯把残渣洗涤2~3次,转移到刻度试管,再补加乙酸乙酯至总量为10mL,以空白试验作参比测出吸光度,在波长485nm下比色,根据标准曲线,得到TTC还原量。
1.4.2.2.3 结果计算
根系活力=C/(1000*W*h) [mg TTF/(g•h)]
    式中:C—四氮唑还原量,μg;W—根重,g;h—时间,h;
1.4.2.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定
1.4.2.3.1 试剂
(1)A:Tris 0.2mol/L         (2)B:HCl 12mol/L
(3)250mLA+200mLB定溶至1000mL pH=8.3
1.4.2.3.2 步骤
表1 SOD活力测定加样表
试剂    对照管    样品管
Tris-HCl缓冲(pH=8.3)    8mL    8mL
粗酶液    -    15μL
连苯三酚溶液    -    10μL
HCl    10μL    -
总量    8mL    8mL
(1)称取植物材料0.1g,分三次加pH=8.3,50mmol•L-1的Tris-HCl缓冲液共1mL。
(2)每个样品设三个重复,于2~4℃下研磨,12000r/m离心15min,制粗酶液。
(3)将8mL50mmol/L(PH=8.3)Tris-HCl缓冲液在25℃保温20min,再加入10µL 50mmol/L的连苯三酚(已在25℃下预热),对照管用10mmol/Lde HCl代替,先加酶液再加连苯三酚。
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