2.3 实验仪器 13

3. 实验方法 13

3.1 在不同组织中mRNA 的表达分布（Realtime PCR） 13

3.2 环境压力处理 16

3.3 制备中国石龙子精巢冷冻切片 17

3.4 TUNEL分析（原位缺口末端标记法） 17

3.5 在精巢组织中Bcl-2 mRNA 的表达情况（Realtime PCR） 18

4. 实验结果 18

4.1 Bcl-2 基因组织特异性表达 18

4.2 中国石龙子精巢中自发凋亡与压力诱导凋亡的免疫荧光分析 19

4.3 不同环境压力处理后Bcl-2 mRNA在精巢中的表达 20

5. 实验讨论和分析 21

5.1 Bcl-2在不同组织中的表达特点 21

5.2 环境压力对中国石龙子生精细胞凋亡的影响 21

5.3 Bcl-2在中国石龙子生精细胞凋亡过程中的作用 21

6. 本章总结 22

7. 展望 22

参考文献 23

致 谢 25

第一章　文献综述

1. 引言

在生物体中，精子发生是一个基本的生物学事件，因为其最终所形成的精子是否具有受精能力，对物种的繁衍具有十分重要的意义。精子发生是一个复杂的生理过程，起初精原细胞经一系列的有丝分裂和减数分裂形成精细胞，而精细胞再经生理和形态上的改变，最终成为成熟精子[1]。无论是高等动物还是低等动物，精子发生过程中异常生精细胞的及时清除是形成高质量精子的重要保障，同时也是物种与环境高度适应的繁殖对策。事实上，由于一半以上的生精细胞会通过细胞凋亡被清除以保证精子质量，所以我们认为精子发生是一个低效的过程。

1972年，Kerr等人首次使用凋亡一词来描述：正常组织中细胞经生理和形态上的一系列变化后被降解的程序性死亡现象[2]。我们可以将凋亡看作是活跃细胞的“自杀”形式，几乎所有的多细胞生物体中都存在凋亡现象。另外细胞凋亡根据诱因不同，可分为自发性细胞凋亡和诱导性细胞凋亡两大类。其中自发性凋亡是指正常精子发生过程中的生精细胞死亡；诱导性凋亡是指由于环境压力影响导致的生精细胞死亡，如激素缺乏、重金属暴露、细胞生长因子缺乏、热休克、冷休克、射线辐射、饥饿和氧化压力等都会诱导生精细胞凋亡。

细胞凋亡不但可以优化支持细胞与生精细胞的比例，清除潜在缺陷的生精细胞，确保高质量精子的产生，而且还可保证精子基因的完整性，阻止可能的基因突变遗传给后代[3-4]。所以细胞凋亡对精子发生的顺利进行意义重大，一旦生精过程中凋亡功能紊乱，会导致精子质量下降，甚至雄性不育，对物种的繁衍具有严重影响。本章将根据已有资料，系统地阐述与生精细胞凋亡和Bcl-2蛋白相关的内容。