第二章 ActB亚基的克隆..7

    2.1 实验材料7

        2.1.1 主要实验仪器..7

        2.1.2 主要实验试剂..7

    2.1.3 试剂、培养基的配制..8

    2.1.4 载体图谱.9

    2.2 实验方法9

        2.2.1 光合玫瑰菌的培养9

        2.2.2 细菌基因组DNA的提取.9

        2.2.3 目的片段的PCR扩增..10

        2.2.4 琼脂糖凝胶电泳11

        2.2.5 PCR产物的切胶回收..11

        2.2.6 PCR产物连接表达载体.12

        2.2.7 连接产物转化到感受态细胞Trans1-T1..12

        2.2.8 菌落PCR的鉴定..12

        2.2.9 重组质粒的提取.13

        2.2.10 重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）14

        2.2.11 菌落PCR鉴定（阳性重组子的筛选）14

    2.3 实验结果15

        2.3.1 ActB亚基的基因扩增..15

        2.3.2 连接产物转化到感受态细胞Trans1-T1后的菌落PCR鉴定.15

        2.3.3 重组质粒转化到感受态细胞BL21（DE3）后的菌落PCR鉴定.16

第三章 ActB亚基的异源表达.17

    3.1 实验材料.17

        3.1.1 主要实验仪器17

        3.1.2主要实验试剂.17

        3.1.3 试剂的配制.18

    3.2 实验方法.18

        3.2.1 SDS-PAGE胶的配制.18

        3.2.2 ActB蛋白的诱导表达19

        3.2.3 SDS-PAGE电泳19

        3.2.4 ActB蛋白的纯化——Ni-IDA Resin（5ml）重力平衡柱亲和层析..20

    3.3 实验结果.20

        3.3.1 ActB蛋白的表达定位分析20

        3.3.2 ActB蛋白的纯化——Ni-IDA Resin（5ml）重力平衡柱亲和层析.21

    3.4. 实验结论与分析..22

        3.4.1 pEASY-E2表达方式与pEASY-E1表达方式的对比..22

        3.4.2 下一步的工作计划..23

致谢..24

参考文献25

附录..27

第一章 引言

1.1 光合细菌概述

    地球上全体生物的生存和发展以及生命的起源，所需的能量最终都来自太阳的光能。光合作用就是各种光合生物将太阳能转变为化学能，同时将水、二氧化碳等无机物转化为有机物来维持自身生长所需的化学反应过程[1]。其它生物的生存都决定于这种初级生产力，所以光合作用是地球上生物界赖以生存和发展的根本。

1.1.1 光合作用的生物

    自然界中能进行光合作用的生物可以分为三大类：绿色植物、藻类和光合细菌。光合细菌是具有原始光能转化系统的原核生物的总称[2]。光合细菌与绿色植物及藻类的不同之处在于它们既不含有叶绿体，也没有类囊体，但是有双层的光合膜系统。例如，在本研究所涉及的丝状光合细菌中就含有一种附着在细胞质膜内侧的特殊捕光天线称为绿小体。光合细菌通常只有一个光系统，使用细菌叶绿素（Bchl）而非叶绿素，光合作用的供氢体也不是水而是其它有机物、硫化物、氨等等。

1.1.2 光合细菌的分类

    光合细菌根据是否放氧，可分为两类：放氧光合细菌和不放氧光合细菌。放氧光合细菌主要指蓝细菌（Cyanobacteria），即蓝藻，属于真核生物；不放氧光合细菌主要指绿硫细菌（Green Sulfur Bacteria）、绿色非硫细菌（Green Nonsulfur Bacteria）、紫细菌（Purple Bacteria）和太阳杆菌（Heliobacteria）等。其中绿色非硫细菌，亦称丝状不产氧光合细菌（Filamentous anoxygenic phototroph），简称FAPs。