近年来，国内外对高产酶活性菌株的研究越来越多，尽管湿地产酶微生物的含量极高，但目前我国对其的开发利用还不是很充分，存在很多不足之处。不少湿地微生物具有产酶活性,但能应用于工业生产的菌株数量很少。在酶生产过程中选择适合的产酶菌株是最重要的前提条件[3]。本实验以杭州西溪湿地生态系统为研究对象，从杭州西溪湿地采集湿地沉积物的底泥样品，采用传统培养法从培养的微生物环境中分离并筛选出具有产酶活性的菌株，并对所得菌株进行酶活力测定，最终得到较高酶活力的菌株，为高产酶活性菌株的工业生产奠定了一定的基础，具有一定的经济利用价值。同时，扩大了微生物菌种资源的开发和微生物酶的生产应用，具有一定的指导意义和实际意义[4]。

1 材料与方法

1.1 样品

在杭州西溪国家湿地公园湿地植物园中，设计了采样点。建设湿地植物园遵循的是优势种植模式，将种类不同的水生植物大面积的种植在一定范围的水域，使其在该水域占主导地位。选择的水生植物主要包括：（1）挺水植物群落：蒲苇、白茅；（2）浮水植物群落：睡莲、凤眼莲；（3）湿生植物群落：美人蕉、黄菖蒲；（4）沉水植物群落：金鱼藻、狐尾藻。在4种不同水生植物生境下，采集表层沉积物(0-10 cm)。将不同的样品编号为1号～4号，每种样品做三个重复采样。采集后的样品迅速放入无菌保鲜袋中，4℃保存。

1.2 分离培养

1.2.1制备培养基 

牛肉膏蛋白胨培养基：琼脂粉20g，NaCL 5g，蛋白胨10g，牛肉膏5 g，pH7.0~ 7 .2。

牛肉膏蛋白胨稀释培养基：将原有牛肉膏蛋白胨培养基稀释10倍，培养基琼脂终浓度为1.5%。

丙酮酸钠培养基：在原有牛肉膏蛋白胨培养基中添加0.125%丙酮酸钠。

1.2.2菌株的分离培养

在锥形瓶(含玻璃珠)中加入10g沉积物样品以及90 mL无菌生理盐水，并在180 r/min振荡0.5h。于室温中静置，自然沉降后取上清液进行梯度稀释，取浓度分别为10-4、10-5、10-6的稀释液100ul，涂布于M1、R2A NB及DNB培养基上源+自-优尔:文,论/文]网[www.youerw.com，每个梯度涂布3块平板作为平行实验，用保鲜膜将涂布后的平板包好，放置在28℃培养箱倒置培养5-7天，待出现明显单菌落后计数，挑取表型特征不同的单菌落，反复划线分离至获得纯化菌株，试管斜面4℃保藏，每隔数月转接一次。

1.3 产酶菌株的筛选

利用三种鉴别培养基对分离得到的菌株进行筛选，即平板水解圈法。在鉴别培养基上添加有酶作用的底物制成筛酶平板, 倒置培养至形成明显菌落,观察底物作用状况以定性地确定菌种产酶能力[5]。若平板出现了透明圈，即说明该种菌具有分泌相应酶的功能。根据已有的结果，计算水解圈与细菌直径的比，比值越大，表明该种菌的产酶活性越高。

1.3.1 产淀粉酶菌株的筛选

淀粉培养基: NaCL 5g，琼脂粉20g，可溶性淀粉1%，蛋白胨10g，牛肉膏5 g，调节pH为7.0~ 7 .2。121℃ 高压蒸汽灭菌20分钟。

将菌株接种在淀粉培养基制成的平板上，37℃光照培养箱中培养1周至2周直到形成明显的菌落。将Lugol’s碘液均匀的分布在平板上，观察透明圈的产生情况。 若出现透明圈，则为淀粉酶产生菌。记录透明圈直径以及菌落直径，并计算透明圈与菌落直径比。

1.3.2 产脂肪酶菌株的筛选 

脂肪培养基：酵母粉0.5 g , (NH4)2SO4 0.5 g，KH2PO4 0.3 g，NaCl 0.5 g，MgSO4,·7H20 0.2g，琼脂20.0 g，pH7.0~ 7 .2，121℃ 高压蒸汽灭菌20分钟，灭菌冷却至60℃左右加入均质后的2%的三丁酸甘油酯溶液，用紫外灯照射灭菌30 min以上备用。