1.3.5 过氧化氢酶(CAT)活性测定
  1、试剂配制:
(1)0.15 mol/L磷酸缓冲液PBS(pH 7.0):将457.5 ml A母液和292.5 ml B母液混合定容至1000 ml。
(2)反应混合液配制:取200 ml 磷酸缓冲液,加入0.3092 ml 浓度为30 %的H2O2摇匀即可。
  2、样品测定:将100 μl酶液加入3 ml反应液中,用磷酸缓冲液调零,测定OD240值,40 s后重新测定。
  3、酶活性计算:以每分钟OD值减少0.01为1个酶活性单位(u)。
CAT = ( ΔA240 × Vt )/(W × Vs × 0.01 × t)(u/g min)[5]
ΔA240:为反应时间内吸光度的变化;W为样品鲜重(g);t为反应时间(min);Vt为提取酶液总体积(ml,3 ml);Vs为测定时取用酶液体积(ml, 0.1 ml)。
  1.3.6抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的测定    
1、试剂配制:
(1)0.05 mol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液(pH 7.0)的配制:
 分别取K2HPO4•3H2O:6.9607 g,K2HPO4:2.6538 g,两者混合起来用去离子水定容到1000 ml。
(2)0.1 mM EDTA-Na2:用缓冲液将0.01861 g EDTA-Na2定容到500 ml;
(3)5 mM AsA:用缓冲液将0.044 g抗坏血酸定容到50 ml;
(4)20 mM H2O2:用去离子水将0.2 ml浓度为30 %的H2O2稀释到100 ml。
2、酶活性的测定:
(1)取0.10 ml 酶液,加入1.70 ml 含0.1 mM EDTA-Na2的PBS(0.05 mol/L,
pH 7.0),再加入0.10 ml 5 mM的AsA,最后加入0.10 ml 20mM H2O2,立即在20℃下测定D290(紫外)值在40s内的变化。
     计算公式[5]:       △OD / △t × Vr × VT  
          A × d × Vt × W
     △OD为反应时间内吸光度的差值;△t为反应时间(40秒);Vr为反应液体积(2 mL);VT提取液体积(3 mL);A为消光系数(2.8 mM-1.cm-1);d为比色杯厚度(1 cm);Vt测定液体积(0.1 mL);W为样品鲜重。
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