和植物保护等领域的应用,为植物病原真菌的绿色防治提供重要且新颖的思路及方法。同时了解壳寡糖对实验室保存的几种植物真菌菌落生长情况以及产孢量的影响,从而使理论更有说服力更加科学,更有说服力。

1 材料与方法1.1供试材料

1.1.1 供试菌:        

表 1 抑菌活性测试所用菌株

Table 1  Strains used in the antifungal activity test

 1.1.2 培养基:土豆葡萄糖琼脂培养基(PDA)

1.1.3 试剂:壳寡糖(购自肇庆长龙生物科技有限公司)

1.1.4 仪器:高压灭菌锅,恒温培养箱,血球计数板,显微镜,电磁炉,烘干箱

1.2 实验方法

1.2.1  配制PDA培养基和含壳寡糖的PDA培养基

    制作500 mL的PDA培养基,需要称取100 g的新鲜土豆。将土豆削皮并切成小块,加入500 mL的蒸馏水煮沸,直至玻璃棒轻戳土豆即破。取一个500 mL的大烧杯并加入10 g的葡萄糖,取四层纱布放于烧杯上,过滤上述煮好的土豆液,搅拌均匀,源)自(优尔+文=论]文]网[www.youerw.com。取四只250 mL的锥形瓶,加入适量的壳寡糖与上述液体配成终浓度分别为0、0.5、1和2 mg/mL,体积为90 mL的液体。分别加入琼脂粉1.35 g,搅拌均匀并分别标记,即PDA和含壳寡糖的PDA培养基。给锥形瓶加塞并包好与包好的培养皿放入高压蒸汽灭菌锅,在121 ℃灭菌30 min。灭菌结束后,在70 ℃烘箱中烘干20 min,即可。

1.2.2 操净台的使用,以及倒平板

    在使用超净台前要先开紫外灯15 min,紫外照射结束10 min后再使用操净台以防光复活。紫外照射杀菌后将所需的物品放入超净台内,并将双手洗净。用酒精仔细棉擦拭双手,包括手腕处。点燃酒精灯,趁PDA培养液未凝固之前倒入培养皿,注意培养皿尽可能的开口要小,以防污染。放置30 min,待凝固后使用。

1.2.3 接种

    将直径6 mm打孔器灼烧灭菌,放冷之后,在所接种的真菌的菌落上打菌饼(大约20个)。用无菌接种针将接直径6 mm的菌饼分别挑取至到壳寡糖浓度分别为0.5、1和2 mg/mL以及对照组的PDA培养基上,放置在培养基中央,菌丝面朝下。在28 ℃的培养箱中培养,每天用十字交叉法量取菌落的直径,记录数据。

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