摘要以薯肉色不同的几个甘薯品系为研究材料，克隆了与花青素生物合成途径中的关键基因IbC4H基因（肉桂酸羟化酶基因），并对克隆的序列多次测序，使用DNAman软件分析其基因序列差异。结果表明：①在序列中第269、983位的突变使氨基酸由极性氨基酸变为非极性氨基酸，第314、995位的突变使氨基酸由非极性氨基酸变为极性氨基酸，可能对该基因编码的蛋白质有较大影响。②比较几个品系C4H基因的cDNA序列后发现，在不同甘薯品系中均存在8个SNP，且其中的7个为有义突变。50722

毕业论文关键词：甘薯  薯色  IbC4H基因  克隆  SNP

Sequence comparison of IbC4H gene in different flesh-colored sweet potato

Abstract

In the same origin but different strains of sweet potato several colors as research materials, cloned with anthocyanin content-related key genes IbC4H gene (cinnamic acid hydroxylase genes), and the sequence of multiple cloning sequencing software use DNAman analysis of the gene sequence differences. The results showed that: ① the first in a sequence of amino acid mutations 269,983 bits of the polar amino acids into non-polar amino acid, and 314,995 by the amino acid position mutation nonpolar amino acids into a polar amino acid, may be the the protein encoded by the gene have a greater impact. ② relatively few lines after C4H gene cDNA sequence found in different strains are present Sweet Potato 8 SNP, and wherein 7 is sense mutations.

Key words：sweet potato  color  IbC4H gene  cloning  SNP

目录

摘要 I

Abstract II

目录 III

1 引言 1

2 材料与方法 1

2.1 材料与试剂 1

2.2 CTAB法提取总DNA 2

2.3 基因片段克隆 3

2.4 扩增片段与T载体的连接 3

2.5 目的菌落的培养 3

2.6 挑选目的菌落并进行PCR 4

2.7测序 4

2.8基因序列比对 4

3 结果 4

3.1 不同薯色甘薯品种IbC4H的部分基因序列扩增 5

3.2 T-A克隆及转化 5

3.3 菌落PCR检验 6

3.4 白薯C4H基因序列差异分析 7

3.5 紫薯IbC4H基因序列差异分析 10

4 讨论 11

参考文献 11

致谢 12

1 引言

甘薯是一年生或多年生蔓生草本，是世界上十大主要粮食作物之一[1]，也是我国仅次于小麦、水稻、玉米的第四大经济植物，紫甘薯块根中富含有花青素[2]。花青素是存在于植物中的一种水溶性色素[3]，是迄今为止所发现的最强效的自由基清除剂[4]，具有抗动脉硬化、抗突变、抗氧化衰老、抗癌等功能[5]；此外，花青素还是一种安全无毒的天然食用色素[6]。因此，花青素在园艺，医药，化妆，食品等方面具有一定的应用潜力和研究价值[7]。

肉桂酸羟化酶基因（Cinnamate 4-hydroxylase，IbC4H）编码肉桂酸羟化酶，该酶是植物花青素生物合成途径中的一个关键酶，处于花青素合成途径的上游位置[8]，IbC4H在花青素合成途径中，催化本丙烯酸（肉桂酸）生成对羟本丙烯酸（香豆酸）[9]。IbC4H基因在不同植物中的拷贝数不同，对于苯基丙酸类代谢由非常重要的作用[10]。