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图2-1 菌株MY15的涂布图 5

图2-2 菌株MY15的三区划线图 5

图2-3 革兰氏染色（100倍) 6

图2-4 菌株MY15的电镜图 6

图2-5 温度对MY15菌株生长的影响 6

图2-6 盐浓度对MY15菌株生长的影响 7

图2-7 pH对MY15菌株生长的影响 8

图2-8 PCR扩增产物电泳图 9

图2-9 菌株MY15的16SrDNA系统进化发育树 11

表清单

表序号 表名称 页码

表1-1 PCR反应条件 4

表2-1 API20NE非肠道菌鉴定系统鉴定的MY15菌株的血清学特征 8

表2-2 菌株MY15的16SrDNA序列在EzTAxon SERVER数据库中与已知菌株的16SrDNA序列的同源性比较 10

引言

海洋中的物种多种多样，尤其是微生物，不仅种类繁多，而且分布广泛。这一切都是由于海洋具有独特的生物生存环境，例如：高压、高盐、低温等，海洋微生物可以在这些条件下生存并造就了它们种类的特异性，加之它们的生存环境特殊，故具有一些新兴特性，从而引起了海洋微生物学家对海洋微生物的探索[1]。

海洋中的微生物在物质循环中起到了生产者、贮存者和分解者的作用。一些异养细菌、真菌和个体很小的原生动物可以通过不同的代谢途径和方式将海洋里的有机物分解成无机物，给初级生产者再利用或者贮存在海底。本实验从东海海水中取样，分离出了具有降解木质素及其他芳香族化合物的菌株，命名为MY15，通过实验证明其属于海单胞菌属。

海单胞菌属（Marinomonas)最初在1983年提出，它是在对交替单胞菌属的菌种归类中被发现的，海单胞菌属是海洋细菌中的一个重要分支，有助于我们研究海洋微生物多样性及其他海洋微生物的特征和生物学作用、意义[2]。

本文采用微生物纯培养方法和分子生物学方法等对MY15菌株进行了分离、鉴定和生长特性研究，主要包括：样品采集、菌株富集培养、菌株的分离和筛选、生长特性测定、总DNA提取、PCR技术、琼脂糖凝胶电泳、16SrDNA基因提取、扩增、测序等，对相似性序列进行系统发育分析并构建系统发育树[3]。通过以上分析，更清楚的掌握了分离出的MY15菌株的生物学性状，为以后研究海单胞菌属的其他菌株特性奠定基础。同时，由于该菌株具有降解木质素的特性，可为将来污废水的生化处理提供可靠依据[4]。

1  材料与方法

1.1实验材料

1.1.1样品的采集

2015年9月，取东海海域(海拔0米，北纬24.13°，东经119.25°)海水，为下一步分离纯化做准备。

1.1.2实验试剂与仪器

主要试剂：草酸铵结晶紫溶液、碘液、番红染液、95%乙醇、Taq DNA聚合酶、dNTP、10×Buffer、镁离子、上游引物(8 to 27)：AGAGTTTGATCCTGG、下游引物(1507 to 1492)：TACCTTGTTACGACTT、双蒸水、无菌水、Marker、Loading Buffer、EB染液、琼脂糖、TAE溶液、木质素、山梨醇、甘露醇、维生素B1以及各种糖类等。