琼脂糖凝胶的配置：琼脂糖1克、1×TAE溶液 100毫升。

TAE溶液的配置：Tris242克,Na2EDTA·2H2O37.2克,800毫升去离子水，57.1毫升冰乙酸，用NaOH调节pH至8.3,再加去离子水至1升。

主要仪器：手提式高压蒸汽灭菌锅、摇床、干燥箱、PCR扩增仪、电子分析天平、冰箱、移液枪、显微镜、平皿源!自`优尔'文"论(文`网[www.youerw.com、250mL锥形瓶、试管、电泳槽、超净台、凝胶成像观察系统、紫外分光光度计、接种环、涂布棒、玻璃棒、搪瓷杯、pH计、PCR小管等。

1.1.3培养基

海水培养基配方：

SolutionA：22.79克NaCl，3.98克Na2SO4，0.72克KCl，0.27克NH4Cl,47.2毫克Na2HPO4，83毫克NaBr，31毫克NaHCO3，27毫克H3BO4，2.6毫克NaF，1.3克TAPSO，890毫升水，pH7.6(高压灭菌：121摄氏度、30分钟)

SolutionB：11.18克MgCl2·6H2O，1.46克CaCl2·2H2O，24毫克SrCl2·6H2O，100毫升水(高压灭菌：121摄氏度、30分钟)

SolutionC：0.02克FeCl4·4H2O，100毫升水(过滤灭菌)

按照890毫升SolutionA,100毫升SolutionB,10毫升SolutionC的比例混合成海水液体无机培养基；如需配置海水营养培养基则需要加入2克/升胰蛋白胨和1克/升酵母粉；如需配置海水固体营养培养基则需加百分之2的琼脂粉。

1.2实验方法

1.2.1菌株的富集

取25毫升海水加入到以木质素为唯一碳源的海水液体无机培养基中，设定30℃，250转/分钟的摇床振荡培养24小时，重复以上步骤3次。

1.2.2菌株的分离与纯化

在无菌室的超净工作台上，取预先配置并经过高压灭菌的海水固体营养培养基分装到平皿中，待凝。将经过富集培养的锥形瓶里的菌液摇匀，并用移液枪吸取0.5 毫升菌液加入到有4.5 毫升无菌水的试管中，配制成浓度为10-1 的菌悬液，同理在超净台用10倍梯度稀释法依次稀释以上菌液，使菌液浓度依次为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。采用平板涂布法，用100微升移液枪取10-1到10-6不同稀释度的菌液0.1毫升至海水固体营养培养基平板上，并用玻璃涂布棒涂匀，在35℃的恒温培养箱中培养24小时。待菌长出后，取10-4、10-5、10-6三个梯度平板中的单菌落于海水固体营养培养基平板上用三区划线法划线进行多次纯化，培养得到的单菌落用无菌超纯水洗脱，在-70℃下用40%甘油保藏备用[5]。