木质素降解菌CY的分离鉴定及其生长特性研究(3)
1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 菌种 本研究用于分离筛选的菌株来源：连云港海域（海拔 0 米，东经 119.66°，北纬34.59° ） 。
1.1.2 培养基 海水液体无机培养基：Solution A: 22.79 g NaCl，3.98 g Na2SO4，0.72 g KCl，0.27 g NH4Cl， 47.2 mg Na2HPO4， 83 mg NaBr， 31 mg NaHCO3， 27 mg H3BO4， 2.6 mg NaF， 1.3 g TAPSO，890 mL H20，pH 7.6，高压灭菌；Solution B: 11.18 g MgCl2•6H2O，1.46 g CaCl2•2H2O， 24 mg SrCl2•6H2O， 100 mL H2O， 高压灭菌； Solution C: 0.02 g FeCl4•4H2O， 100 mL H2O，过滤灭菌。按照 890 mL Solution A，100 mL Solution B，10 mL Solution C的比例混合配制[5]。 海水营养培养基：在以上培养基中添加 2 g/L胰蛋白胨和1 g/L酵母提取物，混匀，高压蒸汽灭菌后与 Solution C 混匀，则为海水营养培养基。 筛选培养基：以香草酸为唯一碳源的海水无机盐培养基是在海水无机盐培养基经过灭菌后冷却到50 一60°C 后向其中加入适量的香草酸配制成所需要的浓度。 固体斜面培养基：在海水营养培养基中加入 2%的琼脂粉，制成试管斜面。 无机盐培养基：1 L H2O、1.5 g/L NH4NO3、0.5 g/L KH2PO4、1.5 g/L K2HPO4、0.5 g/L NaCl、0.2 g/L MgSO4•7H2O。 1.1.3 主要试剂 无机试剂：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、溴化钠、碳酸氢钠、氟化钠、高硼酸、-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸(TAPSO)、硫酸钠、氯化镁合六水、氯化钙合二水、氯化锶合六水、氯化铁合四水、氯化铵、氢氧化钠、盐酸、EB 染液、PBS缓冲液等。 有机试剂：蛋白胨、酵母粉、木质素、琼脂粉、乙醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇、纤维二糖、乳糖、山梨醇、戊二醛等。 革兰氏试剂：草酸铵结晶紫染液（初染） 、路哥氏碘液（媒染） 、95%乙醇（脱色） 、番红复染液（复染） 、香柏油（镜检） 。 PCR 试剂：TaqDNA 聚合酶、dNTPs、Mg2+、Marker 和loading buffer、正反引物、双蒸水。 1.1.4 主要仪器设备 PCR 仪、高压蒸汽灭菌锅、稳压稳流电泳仪、紫外凝胶成像系统、恒温摇床、紫外分光光度计、冰箱、Eppendorf 微量移液器、无菌工作台、生物显微镜、扫描电镜、电热干燥箱、微孔滤膜、电子分析天平等。
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