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盐胁迫对大豆膜脂过氧化影响研究(2)
2 材料与方法
2.1 供试材料:栽培大豆品种:选择具有普遍代表性混合大豆品种作为试验材料、4cm 无孔塑料花盆作为大豆水培培养器皿。2.2 试验方法:在进行种子萌发前选取颗粒饱满的大豆,用 25℃蒸馏水浸泡约10 时至种子饱胀为止。选择大小一致、表面无损伤的豆种平铺置于有棉纱的培养皿中,在大豆种上铺一层用水浸润的棉纱,后再用适量蒸馏水浇透以保持湿润,置于 25℃恒温箱中黑暗条件下萌发。 待豆种萌发至两片真叶完全展开后移到装有蛭石的花盆中温室培养,自然光照。每盆 4 株,浇 1/2Hoagland 营养液,且培养液每隔一天更换一次。温室连续培养半个月后,将大豆苗分成4 组,第一组大豆幼苗用新配的 1/2Hoagland 营养液处理作为对照,第二组幼苗用含 50mmol·L-1NaCl 的1/2 Hoagland溶液处理;第三组幼苗用100mmol·L-1NaCl的1/2 Hoagland溶液处理,第四组用150mmol·L-1NaCl 的 1/2 Hoagland 处理。每隔两天取长势一致的不同浓度处理的大豆叶子 0.5 g,加入 0.05 mol/L 磷酸缓冲液(pH7. 8)5 mL,冰浴研磨,11000 r/min离心 15 min 后,取上清液为酶提取液。用于测定酶活性。2.3 测定各物质试验方法2.3.1 酶活性测定用愈创木酚测定 POD 活性[9]过氧化氢能将愈创木酚氧化成褐色产物,此褐色产物在470nm处有最大光吸收值。采用 NBT 光还原法进行 SOD 活性的测定[10]核黄素在有氧条件下能与 NBT反应,而SOD却能阻止 NBT 的还原反应,从而使蓝色物质生成速率。采用紫外吸收法测定 CAT 活性[9]。酶的活力单位用比活力单位即单位可溶性蛋白在每分钟吸光度的变化值。2.3.2 丙二醛含量的测定硫代巴比妥酸(TBA)法[11]测定丙二醛(MDA)含量:TBA 在酸性条件下加热能与植物体内丙二醛生成红棕色的物质再用吸光光度法测定其含量。
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