茉莉酸甲酯诱导药用植物大戟悬浮细胞三萜类化合物代谢的分子机制研究(2)
免疫调理等方面有很强的活性。抑癌药物与三萜类一起能够抑制癌细胞生长，并具有抗肿瘤疗效[10]。三萜类化合物由数个异戊二烯去掉羟基后首尾相连构成。普通的是 30个碳原子，也有含27个碳原子的化合物。三萜类化合物种类很多，如：角鲨烯、甘草次酸等，其在植物中的分布也十分广阔，灵芝、大戟、甘草、鲨鱼油等的有效成分中都有三萜类物质。萜类合成主要包含有两条途径：胞质中进行的甲戊二羟酸（Mevalonic acid , MVA）途径和在质体中进行的赤藓糖磷酸酯（Methylerythritol phoaphate, MEP）途径[11]。 MVA途径是三萜类化合物的主要生物合成途径。首先，两分子的乙酰辅酶 A 在乙酰乙酰辅酶A合成酶（AACT）的催化下缩合生成乙酰乙酰辅酶A，然后乙酰乙酰辅酶 A 与乙酰辅酶 A 在 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶 A 合成酶（HMGS）的催化下，通过羟醛缩合反应生成 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶 A （HMG-CoA），然后在HMG-CoA还原酶（HMGR）的催化下转化为 MVA[12]。MVA 通过焦磷酸化和脱水生成异戊烯基焦磷酸（IPP），IPP 在异构酶的催化下转化为其同分异构体二甲基烯丙基焦磷酸（DMAPP）[13]。IPP 和DMAPP 可进一步经过异戊二烯转化酶生成焦磷酸香叶酯（GPP）[14]。接着在异戊二烯转化酶的催化下，GPP 与IPP 生成焦磷酸金合欢酯（FPP）。两个 FPP 在鲨烯合成酶（SS）的催化下，缩合生成角鲨烯，角鲨烯在氧化酶（SE）的催化下生成环氧角鲨烯。然后再通过一系列的环化，氧化等生成不同结构的三萜类化合物。 前期研究发现茉莉酸甲酯可提高药用植物大戟悬浮细胞中的三萜类化合物含量。因此，本项目拟对大戟中的三萜类合成途径中的相关酶基因的表达对茉莉酸甲酯的响应进行研究，分析茉莉酸甲酯促进三萜类化合物积累的分子机制。本研究对今后采取相应方式和技术提升三萜含量，从而解决大戟药源短缺问题有很大帮助。 2 材料与方法 2.1 材料 药用植物大戟取自江苏师范大学后山。经ITS序列鉴定为药用植物大戟。取幼嫩的茎和叶诱导愈伤细胞，大戟悬浮培养细胞经传代后选取生长旺盛的细胞用于茉莉酸甲酯诱导实验。
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