国内外中药材品种混乱现象给中药的安全使用形成了极大的隐患,传统的鉴别方法又有较大的局限性,因此,随着中药产业的不断发展,分子鉴定技术的发展需求随之加大。通过对中药材分子层面的鉴定,可以快速而准确地区分形态相似的不同物种,以此满足各行各业对中药材鉴定的不同要求。随着分子生物技术的不断更新进步,分子标记技术的发展也会不断前进,DNA条形码技术在中药材研究中的应用也会更加广泛和深入。
psbA-trnH 基因间隔序列在植物鉴定的应用
psbA-trnH序列是位于叶绿体的DNA基因组上psbA基因和trnH基因之间的一段非编码序列,长度约为300bp。其是叶绿体间隔区中进化速率最快的序列,两端存在75bp的保守序列,适宜的长度,使该片段的引物具有较好的通用性和较高的扩增成功率[5-8],故其在植物组间及种间的系统研究和分子鉴定方面有广泛应用。[9]近年来,DNA条形码技术发展迅速。许多著名学术期刊报道了DNA条形码研究,如Science[25], Nature[26], PNAS[27-28], PLOS ONE[29-30]等。在动物研究中DNA条形码技术已得到广泛的应用,采用线粒体COI基因中一段约650 bp的DNA片段作为标准条形码。迄今为止,在陆生植物中还没有找到通用性DNA条形码。尽管如此,植物DNA条形码的研究依然在迅速有效的进行。
Kress 等[10]的研究表明,叶绿体psbA-trnH序列对陆生植物有较好的区分作用,尤其是开花类的植物,展现了其优秀的种间鉴别能力。李晓娟[17]等基于叶绿体psbA-trnH基因间区序列将山东丹参鉴定为新种。宋炳轲[24]等也针对原植物大麻及其混伪品的鉴别相应地研究了基于psbA-trnH条形码序列的DNA条形码技术,结果显示该技术在涉及植物鉴定的犯罪案件中有较大的应用前景。
研究目的与意义
种质资源的准确鉴定是植物种质资源保护、新品种选育和种质创新的重要基础。本研究的目的是利用条形码候选序列psbA-trnH对酸浆属物种进行分子鉴定研究,进而建立酸浆属植物快速鉴别技术体系。本研究的开展将为酸浆属种质资源提供快速鉴定技术方法,对酸浆属种质资源的保护和利用具有重要意义。
1 材料与方法
1.1供试材料
本实验供试材料包括来自8个酸浆属物种的34个样本,以及3个假酸浆样本,详细信息见表1。种质经过与中国科学院研究所植物标本馆网站(http://www.nhpe.org)上的标本进行核查与确认,凭证标本存放于浙江省药用植物种质改良与质量控制技术重点实验室。
Table 1 Voucher information for 8 Physalis species and 4 samples of Nicandra physaloides in this study.
Subgenus Section Species Name Voucher/GenBank No. Locality information
Rydbergis Angulatae P. angulata L. PHZ0001 Xiaoshan, Hangzhou, Zhejiang, China
P. angulata L. PHZ0002 Lin’an, Hangzhou, Zhejaing, China
P. angulata L. PHZ0003 Luotian, Huanggang, Hubei, China
P. angulata L. PHZ0004 Luotian, Huanggang, Hubei, China
P. angulata L. PHZ0005 Wenzhou,Zhejiang,China
P. angulata L. PHZ0006