市售酵母发酵菌粉中酵母菌特性研究(2)
1. 材料和方法
1.1 实验材料和培养基
1.1.1 研究菌株
菌种：从超市买来的安琪牌高活性干酵母粉中活化，分离纯化得到的酿酒酵母。
1.1.2 培养基成分与配制方法
（1）菌种的分离纯化培养基：选用YPD培养基：溶解10 g酵母膏, 20 g蛋白胨，20 g琼脂粉于900 mL水中,高压蒸汽灭菌121℃ 20 min；灭菌后加入100 mL葡萄糖溶液（含葡萄糖20 g）；自然pH。
注：葡萄糖溶液混合后在121℃高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合[6]。
（2）马铃薯液体培养基：选用新鲜马铃薯剥皮称重200 g，将其切成小薄片于锅内煮沸50 min，不断搅拌、加水，防止糊锅，利于过滤；煮过后用12层纱布过滤；蔗糖20 g，定容至1000 mL，自然pH。
（3）无碳基础培养基：KH2PO4 3 g，MgSO4•7H2O 5 g，蛋白胨10 g,加蒸馏水定容至1000 mL, pH 6.5。高压蒸汽灭菌121℃ 20 min[7]。此培养基适用于测定酵母菌对碳源的利用(加待测碳源1%)。
（4）无氮基础培养基:葡萄糖10 g，KH2PO4 3 g，MgSO4•7H2O 0.5 g，酵母膏 0.1 g，加无氨蒸馏水定容至1000 mL，pH 6.5。高压蒸汽灭菌121℃ 20 min[7]。此培养基适用于测定酵母菌对氮源的利用(加待测氮源1%)。
1.1.3 其他实验试剂
美兰试剂，浓盐酸，氢氧化钠，无水乙醇，氯化钠，葡萄糖，乳糖，麦芽糖，蔗糖，半乳糖，KNO3，(NH4)2SO4，尿素，赖氨酸。
1.1.4 实验仪器
电子天平AL204： 梅特勒托利多仪器（上海）有限公司
实验室pH计EL20： 梅特勒托利多仪器（上海）有限公司
海尔冰箱BCD-215KCM： 青岛海尔股份有限公司
汽浴恒温振荡器THZ-82A： 上海一恒科学仪器有限公司
洁净操作台SW-CJ-2FD： 苏州安泰空气技术有限公司
立式压力蒸汽灭菌器LDZX-50KB： 上海申安医疗器械厂
可见分光光度计722S： 上海菁华科技仪器有限公司
万用电炉DL-1： 北京中兴伟业仪器有限公司
多功能电磁炉C21-RK2106： 广东美的生活电器制造有限公司
显微镜CX21FS1： OLYMPUS
1.2 实验方法
1.2.1 菌株的活化与分离培养
称取安琪牌高活性干发酵粉5 g，溶于100 mL无菌水中，混合均匀。在无菌条件下，用涂布棒沾取该混合液接种于YPD培养基上，35℃恒温培养48 h。然后用接种环挑去纯种菌落，在YPD培养基上划线培养[8]。将划线培养分离得到的平板置于4℃条件下保存，以供后续实验使用。
1.2.2 酵母菌的形态学观察
首先对划线分离培养出的酵母菌进行菌落形态的观察，主要是对其菌落的颜色、大小、质地、表面特征、边缘形状、隆起度等特征[9]进行观察。
然后观察酵母菌细胞的形态特征，采用美蓝染色法。染色后在显微镜下进行观察[10]。
1.2.3 酵母菌生长曲线的测定
在无菌条件下，用接种环从平板上挑取一些菌体置于50 mL无菌水中，溶解混匀。吸取1 mL菌液至70 mL液体马铃薯培养基中。设置2个平行组，测定其OD值，最后取其平均值[11]。自然pH，置于恒温摇床中，转速设为110 r/min，连续培养48 h，每隔6 h测一次吸光值。吸收波长选定为660 nm[12]。