市售酵母发酵菌粉中酵母菌特性研究(3)
1.2.4 发酵条件对酵母菌生长活性影响的试验
1.2.4.1 温度对酵母菌生长活性的影响
在无菌条件下，从YPD培养基平板上挑取酵母菌体溶于50 mL无菌水中，溶解混匀。吸取1 mL菌液至含有70 mL液体马铃薯培养基的三角瓶中。设置温度梯度为20℃、25℃、30℃、35℃进行摇床培养[13]，每组均设置A、B两个平行组。同时设置空白对照组。将培养基置于各个温度下摇床中连续培养24 h，转速110 r/min。测量各组24 h后的吸光值，吸收波长设定为660 nm。
1.2.4.2 pH对酵母菌生长活性的影响
设置pH梯度分别为3、4、5、6、7。由于pH对培养基灭菌后的颜色影响较大，因此应当在每组设置两个平行组后再增加一个空白对照组[14]。培养基经灭过菌后，在无菌条件下，从YPD培养基平板上挑取酵母菌体溶于50 mL无菌水中，溶解混匀。吸取1 mL菌液至各个培养基中，各个对照组加入等量的无菌水。将锥形瓶置于各个温度下的摇床中连续培养48 h，转速110 r/min，每隔12小时测量吸光值。吸收波长设定为660 nm。
1.2.4.3 NaCl对酵母菌生长活性的影响
首先调节培养基的NaCl浓度，分别设置NaCl的质量分数为0%、2%、4%、6%。因此在含有70 mL液体培养基的锥形瓶中分别加入氯化钠0 g、1.4 g、2.8 g、4.2 g，每组设置两个平行[15]。灭菌后，在无菌条件下，从YPD培养基平板上挑取酵母菌体溶于50 mL无菌水中，溶解混匀。吸取1 mL菌液至各个培养基中。将锥形瓶置于各个温度下的摇床中连续培养48 h，转速110 r/min，每隔12小时测量吸光值。吸收波长设定为660 nm。
1.2.4.4 酒精对酵母菌生长活性的影响
酒精具有挥发性，因此应先进行培养基的灭菌再调节酒精浓度。分别设置酒精体积分数梯度为0%、3%、6%、9%，自然pH下进行试验。则应在含有70 mL液体培养基的锥形瓶中分别加入无水乙醇0 mL、2.1 mL、4.2 mL、6.3 mL，每组设置两个平行。从YPD培养基平板上挑取酵母菌体溶于50 mL无菌水中，溶解混匀。吸取1 mL菌液至各个培养基中。将锥形瓶置于各个温度下的摇床中连续培养48 h，转速110 r/min，每隔12小时测量吸光值。吸收波长设定为660 nm。
1.2.5 碳源同化试验
设置5组碳源：乳糖、麦芽糖、半乳糖、蔗糖、葡萄糖作为酵母菌生长所需的碳源[16]，各称取10 g,分别加入到70 mL无碳基础培养基上。灭菌后，在无菌条件下，从YPD培养基平板上挑取酵母菌体溶于50 mL无菌水中，溶解混匀。吸取1 mL菌液至各个培养基中。将锥形瓶置于各个温度下的摇床中连续培养48 h，转速110 r/min，每隔12小时观察其生长情况，通过培养基内浑浊物判定其是否会被利用[17]。
1.2.6 氮源同化试验
设置4组氮源：赖氨酸、尿素、硫氨酸、硝酸钾，各称取10 g加入到70 mL无碳基础培养基上。灭菌后，在无菌条件下，从YPD培养基平板上挑取酵母菌体溶于50 mL无菌水中，溶解混匀。吸取1 mL菌液至各个培养基中。将锥形瓶置于各个温度下的摇床中连续培养48 h，转速110 r/min，每隔12小时观察其生长情况，通过培养基内浑浊物判定其是否会被利用。
2．结果与分析
2.1 形态学观察
经划线分离纯化培养得到单一的酵母菌菌落。该菌落颜色为乳白色，形状为圆形，直径约3 mm，呈锥形向上隆起。菌落表面光滑湿润，不透明。
经美兰染色法镜检观察，该酵母菌细胞呈椭圆形或长卵形，细胞饱满，易观察。
2.2 生长曲线的测定
图1 酵母菌的生长曲线
如图可知，该试验发酵粉中的酵母菌在现给定条件下，24小时后就能生长达到最大值,表现出该酵母菌具有快速繁殖的特性。其生长过程呈现出明显的调整期、对数期、稳定期 [18]。该菌的对数期出现在第12~18小时之间，是菌体大量增殖的时期，因此这个数据可以对该发酵粉的性能产生一定的影响。