2.2  实验方法

2.2.1  两种不同形态钼肥的配制

分别配制络合态钼肥（甘氨酸钼）和钼酸钠。

1. 配制络合态钼肥（甘氨酸钼）：称取适量甘氨酸与钼酸钠，加入定量去离子水，室温搅拌溶解，配制浓度为40mg/L，放入冰箱备用即可。

2. 配制无机钼肥：称取适量钼酸钠与去离子水直接搅拌相溶，配制浓度为40mg/L即可。

2.2.2  豌豆幼苗的培养及处理

1、选取颗粒饱满的豌豆种子，1%次氯酸钠消毒30min后用去离子水冲洗多次，清水浸种；然后将种子用布包好，置清水中浸泡3-4h，再置于50-55℃温水中浸泡15min；用多层湿布包好，于24-35℃温度下催芽，每隔约6h翻动一次，并注意补充水分。

2、当豌豆种子发芽后，胚根长达3至5cm长时进行移苗。选取15×20cm的黑色塑料培养盆，内置约五分之四的纯水，用纱布包裹已灭菌的白色塑料泡沫（其上用打孔器打孔有5至7个小洞），以固定豌豆幼苗的稳定生长。每盆培养盆中栽种约4-6棵豌豆幼苗，待长势齐整后去除长势不均的幼苗，以保证生长的同一性。

3、刚移苗后，先用纯水进行培养，期间豌豆植株在没有外界营养物质供应的情况下，消耗自身子房内养分，大致7d后，用改良霍格兰氏培养液进行培养。记得每次换营养液的时候要用去离子水对幼苗根部进行清洗，以防根部代谢废物对其产生毒害作用。文献综述

4、用络合态钼肥（甘氨酸钼），以无机钼酸钠为对照，每处理三个重复，对三叶一心期的豌豆幼苗进行叶面喷施处理，每三天处理一次，第三次处理后一周进行待测的生理指标的检测。

2.2.3  光合速率

叶片的光合速率是叶片的光合作用强弱的一种表示法，又称“光合强度”。它是指光合作用固定二氧化碳（或产生氧）的速度。光合速率的大小可用单位时间、单位叶面积所吸收的二氧化碳或释放的氧气表示，也可用单位时间、单位叶面积所积累的干物质量表示[11]。

采用改良半叶法进行测定。

1. 选择测定样品：每株上选取长势良好且平均的叶片一片（注意不要选取有黄叶现象的叶片）。

2. 叶子基部处理，目的是将叶子输导系统的韧皮部破坏：用打火机将镊子烧烫，立即在叶片基部进行烫伤（两个方向烫，使得基部四周都确保被烫到），用泡沫将烫好的叶柄夹住，以维持叶子的正常形态。 

3. 剪取样品：叶片基部处理完毕后，即可剪取样品。记录时间，开始光合速率测定。一般按编号次序分别剪下对称叶片的一半（中脉不剪下），并按编号顺序将叶片置于密封袋中，将叶置于暗处。3~4h后（光照好、叶片大的样品，可缩短处理时间），再依次剪下另一半叶，同样按编号置于密封袋中（两次剪叶的次序与所花时间应尽量保持一致，使各叶片经历相同的光照时数）。

4. 称重比较：根据叶片大小实际情况剪取适合的定面积的纸片，以纸片为模板剪取与纸片同等叶块，置于坩埚或培养皿中，在烘箱里80℃下烘至恒重（烘5小时后隔一小时随机抽取相同的六个叶片称重），在分析天平上称重比较（称重时从烘箱里拿出一个称一个，保证每片叶片从烘箱中拿出到称完结束时间差不多，防止因为时间过长烘后的叶片吸潮变重）。

5. 记录数据：记录数据分别为称量皿重量、称量皿以及叶片重量和烘至恒重后的称量皿以及叶片重量。最后烘干前后数据之差即该段时间内叶片光合作用所积累的有机物重量，再除以叶片面积就是光合速率。 

按照如下公式计算光合作用强度：