2）将所得裂解液转入2mLShredder Spin管（RNase-Free，Collection Tube）中，4℃12000rpm离心5分钟，在转移根和茎样品裂解液时可将枪头尖端剪去，便于取样。将离心后的上清液转移到新的1。5mL离心管中，加入0。5倍体积的无水乙醇，迅速混匀。

3）混合后的溶液转移到已装入收集管（Collection Tube 2mL）的吸附柱Spin Column RM中，4℃10000rpm离心30秒，弃掉滤液，将吸附柱重新放回到收集管中。加入350 ul Buffer RW1，4℃10000rpm离心1分钟，弃掉滤液。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

4）配置DNase I混合液：提取一个样品总共需80ul，即RNase-Free Water 52 ul，10X Reaction Buffer 8ul，DNase I 20ul（为保证活性，此混合液不能提前配置）。向吸附柱中加入80ulDNaseI混合液，30℃孵育15分钟。

5）加入350  ul Buffer RW1，10000rpm离心1分钟。加入500ul Buffer RW2（使用前已加入无水乙醇），10000rpm离心30秒。重复上个步骤。

6）将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心1分钟(空转)，再将吸附柱放入新的1。5mL离心管中，一起放在已紫外灭菌的的超净工作台上，开启无菌风，室温下10分钟，彻底晾干。

7）加入30ulRNase-Free Water，室温下放置1分钟，10000rpm离心1分钟，保存于-20℃冰箱。注意：本实验全部操作过程均需带一次性手套和口罩，实验所需枪头均为RNA枪头，所需1。5mL离心管均已灭菌。为防止唾液中的酶影响RNA的提取效率而导致RNA降解，实验过程中尽量避免与他人交谈。

为验证提取的总RNA有无降解，取3ul提取到的总RNA，加1 ul Buffer混匀后打入孵育时做好的1%的琼脂糖凝胶中进行电泳约20 min。之后在提前预热好的紫外分光光度计上进行大豆总RNA浓度的测定。若电泳图上出现3条条带，且其中两条较为清晰、明亮，则提取的RNA未降解，测得RNA浓度也在300~2000ng/ul之间，则可进行大豆总RNA反转录cDNA的实验。