CdCl2溶液:用超纯水配成10 mmol·L-1 的母液,现配现用,按所需浓度稀释。
Hoagland营养液:用超纯水配置大量元素Ⅰ、大量元素Ⅱ、微量元素、铁盐,按照4:4:2:1的比例每升溶液中加入大量元素Ⅰ10ml,大量元素Ⅱ10ml,微量元素5ml,铁盐2。5ml,在实验时将其稀释一半,即用1/2Hoagland溶液。
2。2 实验设计
将水稻种子浸入水中,去除漂浮在水面上的干瘪或坏的种子,挑选沉入水中饱满、无损害的种子。用超纯水冲洗数次后放在干净得培养皿里并用水浸泡,后将种子置于28℃温箱中保温,黑暗条件下浸种48h,每天换水,保证水分的干净清洁和充足的水量,萌发后,用镊子将露白一致的种子整齐摆放在纱网上,继续培养,但培养过程中既要保证水量的充足,又不宜水量过多浸没种子。
待幼苗长至一叶一心时,选择长势均一的幼苗用海绵松松包裹,后嵌入厚约1。5cm的打孔泡沫板中,再放入有1/2 Hoagland营养液的2L的塑料箱中,在28℃人工气候箱内进行培养,昼夜光照为14h/10h,湿度为70%。
幼苗适应生长一天后,进行4个处理,即CK、10umol/L CdCl2、75 umol/L CdCl2、200 umol/L CdCl2,每个处理3箱,即3个重复,每个重复54株,每2天换一次营养液,每次处理测量各项形态指标,处理10天后取样,进行各项生理指标的测定。文献综述
2。3 水稻表型和生物量测定
2。3。1 水稻表型测定
更换营养液时,即每两天分别取各组幼苗10株,每个处理3个重复,作好标记,以后均测这10株,观察叶片形态、测定株高根长,并做好记录。
2。3。2 水稻生物量测定
随机取样后,用吸水纸吸干幼苗表面水分,用剪刀将地上部和地下部分开,分析天平称鲜重,并记录。将称完鲜重后的幼苗按标号放入对应报纸中,然后在105℃杀青15min后于75℃烘干至恒重,再称其干重,并记录,每个样本3个重复,每个重复10株。
2。4 水稻生理指标测定
2。4。1 丙二醛含量测定
称取各组叶片0。3g,加入10%TCA溶液2ml进行细致研磨,然后加入0。4ml10%TCA进行冲洗,转移至5ml离心管中,于12000r/min下离心10min,离心后取1。6ml上清和0。67%TBA以1:1比例均匀混合,置沸水中水浴30min,冷却至室温后再次离心,倒适量上清于比色皿中分别在450nm、532nm、600nm处进行比色。
MDA浓度C(umol/L)=6。45*(OD532-OD600)-0。56*OD450
可溶性糖含量(umol/L)=11。71*OD450
2。4。2 叶绿素含量测定
将80%丙酮和无水乙醇以1:1体积混匀作为浸提液,称取叶片0。3g,剪成1cm左右小段,放入塑料三角形小管中,外面再裹上报纸以避光,加入浸提液进行提取,一般放置一昼夜即24h即可倒出提取液,测量其体积,以浸提液作为对照,用分光光度计测其在645nm、663nm处的吸光值,计算叶绿素含量。来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*
Ca=12。7*A663-2。69* A645
Cb=22。9*A645-4。69*A663
总叶绿素浓度=Ca+Cb
叶绿素含量=(叶绿素浓度*提取液体积*稀释倍数)/样品重量
其中Ca和Cb表示叶绿素a和叶绿素b的浓度
2。4。3 可溶性蛋白含量测定
可溶性蛋白标准曲线制作:按照如下表格依次加入标准蛋白,超纯水,待其混合后,每管加考马斯亮蓝溶液5ml,充分混匀,静置5 min后测定OD595。