摘要： 植物根围微生物号称植物的“第二基因组”，其与植物的健康息息相关。本研究通过PCR-DGGE分析了施用微生物菌剂后不同时间对黄瓜根围微生物多样性的影响。结果表明：使用微生物菌剂后黄瓜根围细菌多样性显著提高，并且随时间延长处理组和对照组之间差异性愈加明显。在施用微生物菌剂后，黄瓜根围假单胞属细菌逐渐增加并且成为优势种群。75618

毕业论文关键词： 黄瓜，根围，微生物菌剂，微生物多样性

Abstract: Plant rhizosphere microorganisms known as "second genome", which is closely related to plant health。 The study, which is based on PCR-DGGE, analyzed the effects of different times of cucumber rhizosphere microbial persity after the application of microbial agents。 The results showed that: After using microbial agents in cucumber rhizosphere, the bacterial persity increased observably and the differences between the treatment and control groups became more apparent over time。 Moreover, the cucumber rhizosphere Pseudomonas species gradually increased and became dominant populations。

Keywords: mushroom; residue returning; rhizosphere; Microbial persity 

目录

1  前言 3

2  材料与方法 4

2。1  实验设计 4

2。2  土壤采集方式 4

2。3  微生物多样性检测方法 4

2。3。1  土壤DNA的提取 4

2。3。2  细菌16S rDNA片段的PCR扩增 4

2。3。3  PCR产物的变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析 5

2。3。4  DGGE图谱中优势条带的回收与测序 5

2。3。5  数据分析 6

3  结果与分析 6

3。1  土壤样品DNA提取结果 6

3。2  细菌16S rDNA的PCR扩增 7

3。3  PCR产物的变性梯度凝胶电泳（DGGE） 8

3。4  主成分分析 9

3。5  DGGE测序条带的系统发育树构建 10

结论 12

参考文献 13

1  前言

设施农业是综合应用工程装备技术、生物技术和环境技术，创造动植物生长发育的适宜环境，实现动植物生产的现代农业生产方式[1]。截至2010年底，我国设施蔬菜年种植面积估计约达466。7 万hm2，分别占我国设施栽培的95 % 和世界设施园艺80 % 的面积，成为世界上设施面积最大的国家[1]。其中黄瓜（Cucumis sativus L。）是设施蔬菜生产中主要栽培作物，其栽培面积约占设施栽培面积的60%[2]。设施栽培中，蔬菜病虫害的病原菌常潜伏于土壤中，如黄瓜、茄子的枯萎病，疫病等其病菌孢子常在土壤内越冬，来年继续为害。另外大棚内温度高湿度大，在这样小气候条件下，易于蔬菜病虫害的发生和相互传播，对蔬菜为害较大，容易形成恶性循环。随着连作年限的增加，有害真菌的种类和数量增加，土壤中病原菌的拮抗菌减少，进一步加重了土传病害。

其中黄瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum。 sp。 cucumebrium Owen）所引起的重要黄瓜病害，常年发病率10-30%，重病年份可达80-90%。由于保护地的特殊环境条件和长期连作，土壤中的病原菌量积累越来越多，致使黄瓜枯萎病的发生逐年加重。目前主要采取嫁接，生物防治，化学农药以及轮作的方式进行防治。其中，生物防治由于其自身无毒无害，环境友好等特点开始受到越来越多的重视。而生物防治防治效果是否稳定的关键就在于所施用的微生物菌剂对于原有土著种群的影响，能否建立起有利于寄主植物健康的根围微生态。