分子探针，一个最初被Tyagi 和Kramer报导的一种发夹形单链寡核苷酸，其可以经历从茎环结构变化的基础上与靶DNA杂交为开链形式。由于分子探针独特的结构特性，实验研究分子探针传感器在DNA、RNA、蛋白质、金属离子、和小分子检测中已经取得了很大的进步[15-27]。截至目前，大多数分子探针的检测方法是基于荧光淬灭[27,28]。相比于这样荧光方法，由于电化学固定的优势，包括良好的便捷性、低成本、简单的仪器和高灵敏性。基于分子探针的电化学传感器已经引起注意。例如：唐报导的基于T-Hg2+-T配位化学的电化学汞检测[19]。程等开发了基于电化学DNA生物传感器的军团菌分子探针[17]。然而，据我们所知，还没有研究报导有关使用分子探针电化学方法来识别具有序列特异性双链DNA的研究。此外，我们第一次报导了一个既简单又灵敏的电化学传感器，通过生成三重脱氧核苷酸来识别具有序列特异性的双链DNA。

1。实验部分

1。1 实验试剂

硝酸银、精胺、TCEP和铁氰化钾从阿拉丁公司购买（北京，中国）。超纯水由我们实验室自己制备。20 mmol/L磷酸缓冲溶液用于DNA的检测 （pH 7。4）。其余所有的化学试剂都是分析纯级别。所用DNA序列从生工生物公司购买 （上海，中国），序列如图表1所示。

                           表 1。 DNA 序列

                     Table。 1 Sequence of oligonucleotides

MB 5’-Fc-(CH2)6-GAGGTGCTTTTTCTTTTCTTTCTTCACCTC-(CH2)6-HS-3’

Target dsDNA 5’-G来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-AG来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-GAAAGAA-3’

3’-CTTTTTCTTTTCTTTCTT-5’

Control dsDNA 1 5’-G来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-AG来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-GAA-3’

3’-CTTTTTCTTTTTTTTCTT-5’

Control dsDNA 2 5’-GAGAAAG来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-G来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-AA-3’

3’-CTCTTTCTTTTCTTTTTT-3’

1。2实验仪器

所有的电化学测量实验是一个650 E的电化学工作站。一个常规的三电极系统由一个修饰的工作电极、一个铂丝对电极和一个参考电极构成。圆二色谱实验结果从J-810-150S分光偏振计获得。

1。3分子信标修饰电极的制作

首先，将玻碳电极分别放入1。0、0。3、0。05 μmol/L的氧化铝淤浆抛光以获得镜面，并在乙醇/水的溶液中超声波振荡5分钟。然后，金纳米粒子通过电化学沉积到玻碳电极表面[29]。在此之后，纳米金修饰电极浸渍于3。0 μmol/L的分子信标中，并在室温下孵育过夜。在此之前，用三（2-羧乙基）磷化氢将分子探针3’端的二硫键裂解。然后，将DNA修饰电极放在浓度为2 mmol/L的6-巯基-1-乙醇的缓冲溶液中浸泡60分钟。最后，所制备的DNA传感器悬挂于温度4 ℃ PH7。4的缓冲溶液中供进一步使用。

2、结果与讨论

2。1传感器原理

识别双链DNA序列特异性的原理图在图1已示出，二茂铁修饰的分子探针聚集在金纳米粒子表面。所设计的分子探针如下：每个分子探针在其5’和3’端有6个互补碱基，其形成的双链把二茂铁氧化还原探针带到电极表面附近。分子探针的下划线部分是环区，可以与靶双链DNA识别。分子探针与靶双链DNA杂交诱导形成三链DNA结构，它直接诱导氧化还原探针远离电极表面，并导致电流信号降低。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-