MDA是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生能加剧膜的损伤，因此在植物衰老和抗性生理研究中MDA含量是一个常用指标[5]，可以通过MDA含量来了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统的受损程度以及植物的抗逆性。本实验主要以镇稻和洛稻两个品种的水稻为研究材料，在三个温度条件下测定水稻种子萌发过程中POD活性和MDA含量，来探究水稻的抗氧化能力，为优良水稻品种的选育提供有效的参考依据。文献综述

2 材料与方法

2。1 实验材料

供试材料：镇稻99、洛稻998

供试试剂：Na2HPO4。12H2O、NaH2PO4。2H2O、愈创木酚、30％的H2O2、硫代巴比妥酸、去离子水

2。2 实验处理

将18个培养皿在121℃下高温灭菌20分钟，烘干后备用，并贴上标签。本实验共三个处理，处理一为10℃，处理二为25℃，处理三为40℃，实验重复三次。镇稻以Z为标记，分别为Z1-1，Z1-2，Z1-3，Z2-1，Z2-2，Z2-3，Z3-1，Z3-2，Z3-3。同理洛稻以L为标记。

在垫有两层滤纸的培养皿中各加入50粒种子和10 ml蒸馏水，然后分别置于低温10℃，常温25℃，高温40℃的培养箱里黑暗萌发，共培养5天。培养过程中要关注培养皿中的水分，尤其是高温培养箱中的培养皿，温度过高水分更容易蒸发，当培养皿中的水不多时要加适当的蒸馏水。五天后取出培养皿，用镊子剥除稻壳，将留下的种子和芽一起放入5 ml的试管并放置于冰箱中低温保存，避免酶失活。

2。3 实验方法

2。3。1 POD活性的测定

采用愈创木酚法[6]

（1）试剂的配制：0。2 mol/L磷酸缓冲液（PBS，pH6。0）

A母液：0。2 mol/L磷酸氢二钠溶液：称取71。7 g分子量为358。14的Na2HPO4。12H2O，定容至1000 ml。

B母液：0。2 mol/L磷酸二氢钠溶液：称取31。2 g分子量为156。01的NaH2PO4。2H2O，定容至1000 ml。

分别量取A母液123 ml和B母液877 ml，充分混匀后即为1000 ml的0。2 mol/L磷酸缓冲液（PBS，pH6。0）。量取200 ml已配制好的PBS，加入0。076 ml液体愈创木酚（2-甲氧基酚）边加热边搅拌使其混合均匀，冷却后再加入0。112 ml 30%的H2O2，混匀后即所需的反应混合液，并置于冰箱中低温保存。

（2）样品的测定：以PBS对照调零，取3 ml反应液并加入30 μl酶液，测定OD470值，测定时边加样品边测定，测定前等待5s，同时记录OD470值。

（3）酶活的计算[7]：以每分钟OD值变化0。01为一个酶活单位（U）。

POD=（ΔA470×Vt）/( W×Vs×0。01×T)

该方程式中：

△A470：为反应时间内吸光度的变化

Vt—为提取酶液的总体积（ml，1。6 ml）；

Vs—为测定时量取的酶液体积（ml，30 μl）；

W—为样品鲜重（g）；

T—为反应时间（min）。

2。3。2 MDA含量的测定

采用李合生[8]的巴比妥酸显色法，略有改动

（1）试剂的配制：

10%TCA：称取100 g硫代巴比妥酸加蒸馏水定容至1000 ml

0。67%TBA：称取3。35 g硫代巴比妥酸加蒸馏水定容至500 ml（避光保存）

（2）样品的测定：来~自,优^尔-论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

称取0。2 g的样品并加入1。6 ml的10%TCA溶液冰浴研磨，磨好后放置于离心机中离心10min，摆放时要注意相对的离心管中的液体量差距不要太大，转速为12000 r／min，离心结束后取上清液1。5 ml并加入1。5 ml的0。67%TBA，放入沸水浴中煮30min。冷却后分别于OD450、OD530、OD600下测量吸光值。

（3）MDA含量的计算：

MDA浓度C（μmol/L）=6。45×（OD530－OD600）－0。56 ×OD450