2 实验部分

2。1 实验试剂与仪器

实验试剂：

本实验中所用的纯化水为美国Millipore公司纯水、超纯水系统提供；TLC显色剂是需要10% H2SO4乙醇溶液加紫外灯254，365 nm照射才能显色。其余试剂看表格。

试剂 出产公司

乙腈和甲醇（色谱纯） 江苏汉邦科技有限公司

正己烷，石油醚，二氯甲烷，甲醇（分析纯） 南京化学试剂有限公司

三氯甲烷，乙酸乙酯，丙酮，正丁醇，乙醇（分析纯） 国药集团化学试剂有限公司

浓硫酸，冰醋酸（分析纯） 上海久亿化学试剂有限公司

实验仪器：

仪器 出产公司

BS224 S电子分析天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司

KQ-500B超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司

SHB-3 循环式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司

RE-3000D 旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂

Vacucella 22L真空干燥箱 德国MMM公司

Thermo LCQ Advanctage液相色谱仪-质谱联用仪 美国Thermo Electron公司

Bruker Avance 400 NMR核磁共振仪 美国布鲁克（Bruker）公司

DHC-9240A电热恒温鼓风干燥箱 上海精宏实验设备有限公司

Agilent 1260高效液相色谱仪 美国安捷伦公司(四元泵，柱温箱，UV 检测器)

CBIO21多功能暗箱式紫外分析仪 北京赛百奥科技有限公司

2。2 实验过程

2。2。1 化合物的提取分离

 阔叶十大功劳叶的提取分离流程图

2。2。1样品的制备

   取干燥的十大功劳叶晒干后粉碎成粗粉，取3。5 kg粗粉，加入100%乙醇超声提取，过滤，减压回收乙醇，加水使其溶解成混悬液，先用石油醚萃取，再用乙酸乙酯萃取，回收溶剂后得到乙酸乙酯提取物，得到样品粗品。文献综述

2。2。2 装柱

装柱采用的是湿法装柱法。把玻璃柱洗干净，然后晾干，固定在铁架台上。用10:1的氯仿:甲醇溶液将硅胶搅拌，把硅胶浸泡液缓慢倒入玻璃柱中，然后再加压用淋洗剂“走柱子”。通常上面加压，下面再用油泵连接循环水真空泵抽，这样可以加快速度。本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。

2。2。3 上样

将欲分离的样品溶于少量装柱时候用的洗脱剂中，制作成为体积小、浓度高的样品溶液，通过玻璃漏斗，均匀地倒入层析柱中的硅胶面上。上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整。

2。2。4 洗脱

洗脱剂的选用可以通过薄层色谱法筛选，采用梯度洗脱法，洗脱剂的洗脱能力由弱到强逐步递增。先打开柱下端活塞，控制好活塞开口，即洗脱速度，上端不断添加洗脱剂，保持洗脱剂流速保持每秒钟1到2滴。 

2。2。4 收集处理

    等份收集洗脱液，大约收集8ml为一小瓶，按照先后顺序排好，标上序号，将收集好的液体作薄层分析。

2。2。5 薄层色谱法来`自+优-尔^论:文,网www.youerw.com +QQ752018766-

首先是要选择展开剂，本次实验选择用氯仿：甲醇=10:1。先在硅胶板上距离最下端1 cm左右处画直线，然后每隔0。5 cm画点，用毛细管点样，注意每次点样的时候动作要轻快，不然容易戳破硅胶板，而且点不能点太大。等样点晾干后（也可以用吹风机吹干）置于密闭的装有展开剂的层析缸中，溶液会往上跑，等溶剂距离硅胶板顶端1 cm左右时将硅胶板取出来，用吹风机吹干，观察硅胶板上斑点颜色和分离情况，样品会按照不同的极性分离出来，喷洒硫酸-乙醇显色剂显色有助于观察[18]。将硅胶板放在多功能暗箱紫外分析仪中进行观察，相同组分具有相同Rf值[19] 。从硅胶玻璃板上可以看出，分离物质的纯度。在同一条直线上越清晰，纯度越高。