鸡血细胞体外融合的影响因素研究
关键词：细胞融合；聚乙二醇；细胞密度；细胞悬液放置时间；钙离子浓度
Research on Influence Factors of Cell Fusion
of Chicken blood in Vitro
Abstract: The effects of chicken blood cell density, PEG concentration, PEG duration, standing time of chicken blood cell suspension, calcium ion concentration on cell fusion in vitro were studied. The results showed as follows: cell fusion rate was the highest when cell density was 1×107 /ml, PEG concentration was 50%, PEG duration was 10 minutes, standing time of chicken blood cell suspension was 10 minutes, calcium ion concentration was 50.0 mmol/ml.
Key words: Cell fusion；PEG；Cell density；Standing time of cell suspension；Calcium ion concentration
目 录
摘 要 1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1 实验材料 2
1.2 实验方法 2
1.2.1 0.85% NaCl溶液的配制 2
1.2.2 GKN液的配制 2
1.2.3 Hanks液的配制 2
1.2.4 不同浓度的PEG溶液（m/V）的配制 2
1.2.5 鸡血细胞悬液的配制 2
1.2.6 细胞融合实验方法 3
1.2.7 细胞融合率计算 4
2. 结果与分析 4
2.1 细胞融合过程的观察 4
2.2 不同鸡血细胞悬液浓度对细胞融合率的影响 4
2.3 不同PEG浓度对鸡血细胞融合率的影响 5
2.4 不同PEG作用时间对鸡血细胞融合率的影响 5
2.5 不同鸡血细胞悬液放置时间对细胞融合率的影响 5
2.6 不同钙离子浓度对鸡血细胞融合率的影响 6
3. 讨论 6
参考文献 7
致谢 9
鸡血细胞体外融合的影响因素研究引言
细胞融合，又称细胞杂交, 是指在离体条件下人工方法将不同种生物或者同种生物不同类型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。PEG法诱导细胞融合[1]，细胞容易制备、活性稳定，不需要特制的仪器设备、操作方便，融合率较高，因而被广泛用于细胞遗传、细胞免疫、基因定位、病毒、肿瘤等基础研究，也用于单克隆抗体制备和生物新品种培育，同时也被作为大学细胞工程实验写入教材。但在实际操作中，该方法易受许多因素的影响，如PEG浓度、PEG作用时间、鸡血细胞悬液浓度、鸡血细胞悬液放置时间、钙离子浓度等，致使有时融合率不高或不稳定[2]。本研究以家鸡血红细胞为材料，探索细胞融合中，细胞与PEG溶液混匀以获得稳定的细胞融合结果，为动物细胞融合研究和细胞生物学相关实验提供参考。
1. 材料与方法
1.1 实验材料
一龄公鸡全血，PEG，NaCl，Hanks液，0.5% 酚红 ,GKN液；血细胞计数板，刻度离心管，离心机，水浴锅，盖玻片，容量瓶，载玻片，移液管等。
1.2 实验方法
1.2.1 0.85% NaCl溶液的配制
称取NaCl 0.85 g，溶于100 ml的蒸馏水中。
1.2.2 GKN液的配制[3]
称取NaCl 8.0 g、葡萄糖2.0 g、Na2HPO4•2H2O 1.77 g、KCl0.4 g、NaH2PO4•H2O 0.69 g、酚红0.01 g，溶于1000 ml的重蒸水中。
1.2.3 Hanks液的配制[3]