铈对紫外线与铅胁迫下小青菜生理生化特性的影响(2)
已经证明[14-17]，适量浓度的稀土元素能够促进植物的生长发育，提高植物的光合作用效率及其中某些蛋白的活性，增强植物的抗逆性能力，从而提高农作物产量，改善农作物、果实品质。我国在70年代就已经开始大规模的稀土农用，并取得了良好的增产效果。本实验拟研究铈对紫外线与铅胁迫下小青菜生理生化特性(如光和色素含量、抗氧化酶活性、丙二醛含量、脯氨酸含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量等)的影响，旨在探索紫外线辐射与铅胁迫对小青菜生理生化的影响，以及稀土铈防御紫外线辐射与铅胁迫伤害的效果。本研究在理论上有利于揭示紫外线辐射与铅胁迫对植物的损伤机理，在生产实践上为防御或减轻紫外线辐射与铅胁迫对农作物损伤提供新方法。
1. 材料与方法
1.1 实验材料
小青菜种子（上海青鸡毛菜）
1.2 试剂
醋酸铅；氯化铈
1.3 实验方法
1.3.1 小青菜幼苗培养
在25 ℃室温下，将小青菜种子浸种12 h，然后转到铺有6层纱布的磁盘中，每天喷洒清水催芽，4 d后将出芽一致的种子移植到装有土壤的培养盘中，每天浇水，直到长出3片真叶。
1.3.2 铅胁迫液和氯化铈溶液的配制
醋酸铅溶液的制备：取醋酸铅500 mg，放入烧杯中，加适量水溶解，然后转移到1000 mL容量瓶中，定容至1000 mL，即可配制出500 mg/L的醋酸铅溶液，保存备用。
氯化铈溶液的制备：取氯化铈4 mg，加入适量水溶解，然后移入1000 mL容量瓶中加水定容至1000 mL，即可配制出4 mg/L（约16µmol.L-1）的氯化铈溶液，保存备用。
1.3.3 各种处理设置
将长出3片真叶的小青菜幼苗分为3个处理组（铅胁迫处理组、紫外线胁迫处理组、铅与紫外线复合胁迫处理组）和1个对照组，其中铅胁迫处理组采用叶面喷洒法，每天早上8:00用500 mg/L的Pb(CH3COO)2溶液喷洒1次，连续喷洒5 d，紫外线胁迫处理组每天用紫外线照射小青菜幼苗3 h，连续照射5 d，其余时间置于正常条件下培养，铅与紫外线复合胁迫处理组同法每天同时喷洒Pb(CH3COO)2溶液和照射紫外线，对照组同法每天喷洒清水和正常光照下培养。待处理结束后，分别取对照组和各处理组小青菜叶片，测定叶绿素含量、游离脯氨酸含量、丙二醛含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量以及过氧化物酶活性。
1.3.4 氯化铈溶液处理
将进行各种处理的小青菜幼苗分为2份，其中一份在实施各种处理的同时，每天下午18:00用4 mg/L的CeCl3溶液喷洒1次，连续喷洒5 d。待处理结束后，分别取对照组和各处理组小青菜叶片，同法测定各项生理指标。
1.4 生理指标测定方法
(1)叶绿素含量的测定
采用丙酮无水乙醇混合液提取法，即分光光度法[18]测定叶绿素的含量，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(2)游离脯氨酸含量的测定
参照汤章城[19]游离脯氨酸含量的测定方法进行测定。测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(3)丙二醛（MDA）含量的测定
按刘萍[20]等方法测定MDA含量。测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(4)可溶性糖含量的测定
采用蒽酮法[21-22]测定可溶性糖含量，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(5)可溶性蛋白含量的测定
采用考马斯亮蓝法[22]测定可溶性蛋白含量，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(6)过氧化物酶活性的测定
采用愈创木酚比色法[22]测定过氧化物酶活性，以470 nm波长下每分钟每克料的光密度变化表示酶活性的大小，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
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