氧化应激下酵母蛋白的表达模式分析(2)
本文研究一定浓度下重金属铜和镉作用与不同时间对酵母蛋白表达的影响，对于更加深入了解及研究人体内的氧化应激反应具有重要意义，进而推动有关氧化的疾病的研究及治疗。
1. 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 菌株
本实验所用的材料是安琪酵母，其他实验药品均来自周口师范学院生命科学系分子生物学实验室。
1.1.2培养基和缓冲液
（1）YPD培养基(固体)：
成份 质量（g）
酵母膏 5
蛋白胨 10
琼脂粉 10
葡萄糖 10
总体积（mL） 500
（2）YPD培养基（液体）：
成份 质量（g）
酵母膏 5
蛋白胨 10
葡萄糖 10
总体积（mL） 500
（3）破壁缓冲液：0.1 mol/L磷酸缓冲液，pH 7.4
成份 质量（g） 体积（mL）
NaH2PO4 3.12 95
Na2PO4 35.5 405
总体积（mL） 500
（4）凝胶贮备液：4oC冰箱保存
成份 质量（g）
丙烯酰胺（Acr） 29.2
亚甲基双丙烯酰胺（Bis） 0.8
总体积（mL） 100
（5）分离胶缓冲液：1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8 ，4oC冰箱保存
成份 质量（g）
三羟基甲基氨基甲烷（Tris） 18.15
总体积(mL) 100
（6）浓缩胶缓冲液：0.5 mol/L Tris-HCl，pH6.8，4oC冰箱保存
成份 质量（g）
三羟基甲基氨基甲烷（Tris） 6
总体积（mL） 100
（7）10%SDS，室温保存。
（8）质量浓度为10%过硫酸铵：此溶液需临用前配制。
（9）12%分离胶：
成份 体积（mL）
重蒸水 3.35
分离胶缓冲液 2.5
10%SDS 0.1
凝胶贮备液 4.0
10%过硫酸铵 0.05
TEMED 0.005
总体积（mL） 10
（10）5%凝缩胶：
成份 体积（mL）
重蒸水 2.92
浓缩胶缓冲液 1.25
10%SDS 0.05
凝胶贮备液 0.8
10%过硫酸铵 0.025
TEMED 0.005
总体积(mL) 5
（11）2倍还原缓冲液：
成份 体积（mL）
浓缩胶缓冲液 2.5
甘油 2.0
10%SDS 4.0
质量浓度0.1%溴酚蓝 0.5
β-巯基乙醇 1.0
总体积（mL） 10
（12）电极缓冲液：pH8.3，4oC冰箱保存
成份 质量（g）
Tris 3
甘氨酸 14.4
SDS 1.0
总体积（mL） 1000
（13）染色液：
成份 质量或体积
考马斯亮蓝R250 0.25 g
50%甲醇 91mL
冰醋酸 9mL
总体积（mL） 100
（14）脱色液：
成份 体积（mL）
甲醇 50
冰醋酸 75
蒸馏水 875
总体积（mL） 1000
1.1.3 主要试剂
葡萄糖，酵母膏，蛋白胨，琼脂，蔗糖，蒸馏水，浓盐酸，乙二胺四乙酸，β-巯基乙醇，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，三羟甲基氨基甲烷，丙烯酰胺，甘油，溴酚蓝，过硫酸铵，无水硫酸铜，氯化镉等。