摘要： 脂肪蛋白质组学研究可以系统地了解脂肪代谢紊乱相关的疾病的发病机制及干预策略，本文通过建立脂肪组织总蛋白的提取方法，为深入开展脂肪组织蛋白质组学研究提供良好的基础。本课题利用猪腹部的脂肪组织，通过建立尿素提取法、氯仿/甲醇法、尿素/硫脲法、SDS/尿素法和改良Tris-饱和酚提取法这五种方法来提取总蛋白，并采用Bradford蛋白定量和SDS-PAGE凝胶电泳分析，最终优化发现用改良Tris-饱和酚提取法得到的脂肪组织总蛋白得率为（0。27±0。04）%，电泳图谱在70kDa、130kDa、200kDa附近均有丰富的蛋白质条带，是五种实验方案中提取的蛋白条带最丰富，蛋白得率又相对较高，能够满足后续蛋白质组学研究分析的最佳提取方案，为脂肪蛋白质组学研究奠定了基础。80893

毕业论文关键词：脂肪组织；蛋白提取；方法优化；SDS-PAGE

Establishment and Optimization of Adipose Tissue Total Protein Extraction Methods

Abstract: Adipose proteomics studies can systematically understand the diseases caused by adipose metabolic disorders。 This study provides a basis for further research on the development of adipose proteomics by establishing the extraction method of total protein in adipose tissue。 This topic uses adipose tissue of the pig's abdomen, the total protein of the adipose tissue was extracted by urea extraction method, chloroform / methanol method, urea / thiourea method, SDS / urea method and modified Tris saturated phenol extraction method。 Protein was analyzed by Bradford protein assay and SDS-PAGE electrophoresis。 Finally, we found that the total protein of adipose tissue obtained by modified Tris saturated phenol extraction method was the best in the five methods。 It has (0。27±0。04)% extraction protein rate and electrophoretogram protein bands were abundant in about 70kDa, 130kDa, 200kDa。 Tris saturated phenol extraction method was able to meet the subsequent proteomics research analysis and lay a foundation for the research of adipose proteomics。

Keyword: adipose tissue；protein extraction；method optimization；SDS-PAGE

目  录

1。绪论 1

1。1 蛋白质 1

1。2 蛋白质组 1

1。3 脂肪组织 1

1。4 蛋白提取与制备 2

1。5 蛋白质定量 3

1。6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 3

2。本课题的研究目的和意义 4

2。1 本课题的研究目的 4

2。2 本课题的研究意义 4

2。3 国内外研究状况 4

3。实验部分 6

3。1 实验试剂 6

3。2 实验仪器设备 7

3。3 试剂配制 8

3。4 实验方法与步骤 13

4。实验结果与分析 16

4。1 四种提取方法的建立与提取效果的对比 16

4。2 尿素提取法和尿素/硫脲提取法MP震荡优化 19

4。3 尿素/硫脲提取法低温处理优化 22

4。4 尿素提取法料液比优化 24

4。5 改良Tris-饱和酚提取法 26

4。6 结论