2。1 本课题的研究目的

本课题的研究目的是建立尿液总蛋白的提取方法，使用不同方法来提取尿液蛋白，分析不同提取方法对提取蛋白质的浓度、总量以及SDS-PAGE凝胶电泳蛋白条带的影响，优化尿液总蛋白的提取方法。为深入探究尿液蛋白质组学提供基础。

2。2 本课题的研究意义

尿液具有发现疾病生物标志物的几个优点：（1）容易以大量和非侵入性的方式进行收集（2）尿样不如血浆复杂，并携带许多未在血液中被发现的蛋白质，多肽以及氨基酸。因此，近年来许多研究人员正通过深入了解尿蛋白组成发现潜在的生物标志物。

通过建立和优化尿液总蛋白的提取方法，从而对尿液蛋白质组学的研究技术提供基础。人类尿液蛋白质最初的应用是1927年，利用尿液具有无创性和采集方便等特点，人们在孕妇的尿液中发现了一种激素：β人绒毛膜促性腺激素，从而发明了早孕测试纸。近年来由于蛋白质组学研究更加深入，尿液蛋白质组学的研究也越来越全面，特别是尿液中所包含的许多生物标记物的发现成为尿液蛋白质组的研究趋势。

尿蛋白质组学是研究肾脏疾病临床生物标志物的最有吸引力的策略之一。尿液生物标志物对于许多临床应用是不可或缺的，例如：早期检测和诊断，监测对疾病治疗的效果和疾病的发展，预测疾病的预断和后果。在某些情况下，尿液蛋白质组学可能会使那些原本被忽视的问题，重新引起人们的重视。尿液蛋白质组学数据通过对临床监测和应用提供新的见解，从而形成新的突破，开创新的领域[19]。论文网

对于尿液蛋白质组学，未加工的尿液样品是复杂的，包括高浓度的盐，小分子，和一些代谢废物[20]，而且尿蛋白浓度太低以至于难以鉴定。因此，许多样品制备方法已被应用于浓缩尿蛋白和除去小分子，如有机溶剂沉淀、透析冻干、超速离心和超滤浓缩（离心过滤）[20,21]，而前期尿液总蛋白的提取对后续的酶解和质谱分析影响重大，决定着蛋白质的鉴定量。目前使用最普遍的方法是有机溶剂沉淀法和超滤法，而在有机溶剂沉淀法中常用的是丙酮沉淀法，本课题拟通过对提取方法的建立与优化，为尿液蛋白质组学的研究提供基础。

3 实验部分

3。1 实验试剂

表3。1 试剂一览表

试剂名称 生产商 货号

1M Tris-HCl 碧云天 ST768 

Cocktail（100×） Thermo 78445

Coomassie brilliant blue G250 碧云天 ST030

Coomassie brilliant blue R250 碧云天 ST031

PageRuler™ Prestained Protein Ladder， 10 to 180 kDa Thermo 26616

PMSF（100mM） 碧云天 ST506

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（5×） 碧云天 P0015

SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 碧云天 P0012A

TEMED 碧云天 P0012A-5

丙酮 国药 10000418

二硫苏糖醇（DTT）