2。7。4 PCR 扩增 16

2。8  扩增产物测序并判定菌株属种关系 18

2。8。1  测序 18

2。8。2  判定菌株属种关系 18

第三章 结果与讨论 19

3。1  产 DNJ 菌株的初筛 19

3。1。1 菌株的分离 19

3。1。2  初筛结果 19

3。2  产 DNJ 菌株的复筛 20

3。2。1 DNJ 标准曲线 20

3。2。2  产 DNJ 菌株的复筛 21

3。3  单因素法确定产 DNJ 的最佳条件 22

3。3。1 发酵温度 22

3。3。2 发酵时间 23

3。3。3 发酵液初始 pH 24

3。3。4 摇床转速 25

3。4  二次发酵 25

3。5 菌株生理生化鉴定 26

3。5。1 生长特性及形态观察 26

3。5。2 革兰氏染色 27

3。5。3  菌株 XY-1 发酵生长过程中各因素的变化 27

3。6  菌株 DNA 提取并 PCR 扩增 29

3。6。1 扩增产物电泳结果 29

3。7 测序并判断菌株所属 30

3。7。1  测序 30

3。7。2  判断菌株所属 31

3。8  实验展望 31

结 论 32

致 谢 33

参考文献 34

第一章 绪论

1。1  引言

1-脱氧野尻霉素（DNJ）为哌啶生物碱。它能够对葡萄糖苷酶产生阻遏作用， 并可以阻遏抑制糖汲取，减少餐后血糖浓度、防病毒感染、阻遏肿瘤细胞转移等。 当前，DNJ 主要从桑树中提取分离所得，但是它并不是很易获取，并且一般的合成工 艺不能合成获取。因此我们采用从微生物中提取 DNJ 的方法。这是因为细菌的分散 较宽泛，且根源富足，因而其在一般工业生产中被使用的最多。当前找到的可用于 产 DNJ 的细菌菌株，除了链霉菌之外，还有芽孢杆菌属、藤黄微球菌等。而桑树是 目前已知的 DNJ 含量最多的一种植物，所以研究目的就是从桑树园中的土壤来进行

产 DNJ 菌株的筛选。

1。2DNJ 的概述

DNJ 是哌啶类多羟基生物碱，分子式是 C6H13NO4，相对分子质量为 163，其化 学 式 为 （ (2R,3R,4R,5S)-2-Hydroxymethyl-piperidine-3,4,5-triol ） ， 中 文 名 称 (2R,3R,4R,5S)-2-羟甲基哌啶 -3,4,5-三醇），DNJ 的化学结构见图 1-1。

DNJ 最先是从桑白皮中[ 1 ]分离所得，随后 DNJ 在桑树、桑叶、桑枝和细菌的分 泌物等物质中被其他学者分离出来。

一般情况下，DNJ 所带电荷为正电荷，它的分子极性非常大，且在水中的溶解度 高，稀酸环境下能够以盐的形式存在，进而亲水性提高。DNJ 及其衍生物构造中存 在哌啶类生物碱，它的结构与天然糖较相似，根据这个特性 DNJ 又可叫做 1-脱氧氮