1。3。2 猪流行性腹泻病毒病原学 7

1。3。3 猪流行性腹泻病毒流行病学 7

1。3。4 PEDV 的非结构蛋白及其功能 8

1。3。5 PEDV 结构蛋白及其功能 8

1。4 PED 的诊断方法 9

1。5 PEDV 的防控措施 10

1。5。1 非特异性预防 10

1。5。2 特异性预防 10

1。6  本实验研究的目的及意义 10

1。6。1 实验目的 10

1。6。2  实验意义 11

第二章 实验材料及方法 12

2。1  实验所用试剂 12

2。1。1 培养基 12

2。1。2 碱裂法质粒抽提试剂 12

2。1。3 琼脂糖电泳试剂 12

2。1。4 各类酶 13

2。1。5 常用溶液 13

2。2  主要实验仪器 13

2。3  实验内容 14

2。4  实验路线 14

2。5  实验方法 15

2。5。1 培养基 15

2。5。2 引物设计 15

2。5。3 SD 基因的 PCR 扩增 16

2。5。4 SDS-碱裂解法小量抽提 pET28a(+)质粒 17

2。5。5 pET28a(+)质粒单酶切鉴定 18

2。5。6 PEDV SD 基因与 pET28a(+)载体同源重组连接 18

2。5。7 pET28a(+)-SD 重组质粒单酶切 19

2。5。8 Top10 感受态细胞的制备 19

2。5。9  重组子转化 Top10 感受态细胞 20

2。5。10 阳性克隆的筛选 20

2。5。11 pET28a(+)-PEDV SD 菌液 PCR 初步鉴定 20

2。5。12 pET28a(+)-PEDV SD 测序 21

第三章 结果与讨论 22

3。1 PEDV 的基因结构及 S 基因结构分析 22

3。2 SD 基因 PCR 扩增结果 23

3。3 pET28a(+)质粒单酶切鉴定结果 24

3。4 pET28a(+)-SD 重组质粒单酶切鉴定结果 24

3。5  重组子转化 Top10 结果 25

3。6 pET28a(+)-PEDV SD 菌液 PCR 初步鉴定结果 26

3。7 pET28a(+)-PEDV SD 重组质粒的测序结果 27

结论 28

致谢 29

参考文献 30

附录 32

第一章 绪论

1。1 冠状病毒的简介

冠状病毒是所有病毒基因组中最大的病毒，它能够感染多种哺乳动物和鸟 类物种。该病毒在自然界中广泛存在，常常能够引起消化道和呼吸道疾病，具 有胃肠道、呼吸道和神经系统的嗜性。其自身宿主范围广，且在进化过程中容 易发生基因重组和变异，具有高度变异性[1]。论文网