1。2。2 幼体体重的测量

食用甲鱼卵孵化出幼体后，对新生幼体的体重进行测量，并且记录相关数据，比较不同温度处理下幼体体重的区别。

1。2。3 幼体注射细菌TL1

首先，将实验室内的温度控制在26±1 °C，整理培养箱内的水温，使其控制在25±1 °C；然后将新生甲鱼幼体放入水中适应一天。期间，从-80 °C冰箱中取出嗜水气单胞菌TLI，在28 °C的摇床中孵育12h，然后转接至新的试管中，待摇至OD=0。8左右时，便可以停止孵育。然后将转接摇好的菌液吸入离心管中，放入离心机，10000rpm离心5min，弃上清，若一次没有离心完可分次离心。用标准浓度的磷酸缓冲液（PBS）清洗沉淀2次，再离心，最后加入1mlPBS吹打混匀菌体沉淀，便可以进行注射。两种温度处理下的新生甲鱼幼体在出生48h内进行细菌注射，细菌的浓度梯度分别为5×106CFU、5×105CFU、5×104CFU、5×103CFU，每个梯度注射20只，每只食用甲鱼幼体的腹腔注射0。1ml菌液，观察它们10天内的死亡情况，并记录汇总。

1。2。4血清的收集文献综述

待两组不同温度处理下的甲鱼幼体出生后，于48小时内，取5只新生幼体，解剖后取其肝脏和血，作为实验空白对照组。另外留出一批甲鱼幼体，对其注射嗜水单胞菌（TL1），12小时后，取出其中5只存活的幼体，进行解剖，取其血液，作为实验组1；在注射嗜水气单胞菌（TL1）24小时后，再取出其中5只依然存活的甲鱼幼体，进行解剖，取出它们的血液，作为实验组2。将取出的血液样品放入4 °C的冰箱中静置过夜，然后以5000rpm的转速进行低速离心，抽取离心后的上清液，分装保存在多个管中，以便用于日后多次使用。所有采集出的样品都在相应用于保存的管壁和管盖上作好标签，以便日后区分，然后存放于-80 °C冰箱中保存待用。