1。2 培养方法
1。2。1 拟南芥的培养方法
网上查得拟南芥的种植:
1。 土培法
培养基上点种子:1。种子处理1。1 种子消毒处理在培养基中点样前,必须对种子进行消毒,防止感菌,具体方法为:先将种子倒在干净的纸上,挑去大的杂质,再将种子倒入EP管中,加入1mL70%酒精,振荡10min,将种子放在超净台中吹干。1。2 点样将消毒处理后的种子,可以利用牙签点到培养基上,每次仅点一粒种子,根据培养皿的大小,确定一个里面能够点多少个种子,每个90mm培养皿上大约种30粒种子,防止植株长大后影响根与子叶的发育。1。3 春化种子点样完毕后,将培养基密封,置于4℃冰箱里放置72h后,放回温室。1。种种子前,要将营养土用自来水混匀后,121℃灭菌30min,待土冷却后,装入种拟南芥的方盒中,再将方盒放入红色托盘中。2。将要点的种子平铺在称量纸上,用牙签蘸取一粒种子点在营养土上每点一个小盒时都用牙签做标记,以免遗种某个盒子。(每个小盒子种5粒种子,每个大方盒子种9粒种子)3。将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室,并用一个干净的托盘盖在上面,大约两天后就可以打开上面的托盘,待植物长出4片叶子时,可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。
2。 平板种植体系文献综述
取适量种子置于1。5 ml离心管中,加入1 ml 70%乙醇,轻微震荡1 min。去除乙醇,加入10% NaClO消毒10 min。吸去NaClO,用无菌水立即冲洗4次后,加入1 ml无菌水浸泡10 min。吸去水,再次加入无菌水冲洗1-2次。最后加入适量0。1%无菌琼脂溶液,吹打使种子分散,用1 ml移液枪将种子均匀铺于1/2 MS平板上。待表面多余水分风干后,加盖封口,4℃春化3 d。然后将平板转移至光周期为16 h光照,8 h黑暗,温度为22℃,光照强度为100 µmol•m-2•s-1的培养间中,垂直放置培养。将在平板中培育1周的幼苗转移至新的1/2 MS培养基中。苗间距为1。5 cm,加盖封口,放回至培养间中。调节光照强度为50 µmol•m-2•s-1,将平板水平放置培养。
综合对比这两种方法,土培法较为简单,但是这样种植的拟南芥长势不一,对于实验结果有影响。为保证每批苗在同一强度的UV-B处理下,黄酮变化的趋势均相同。故需建立一个稳定的平板培育体系。经实验发现平板中培育的苗长势较为均匀