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1.4.3 冰晶形态分析
冷冻的样品于同等温度下(室温下快速取样),在样品的中心部位,顺肌纤文方向取8 mm长,横截面大约5×5 mm2的小样品,迅速投入同样低温的固定液中固定,并且尽量减少板、刀具和肉之间的温差（预先冷冻至同样温度）。固定方法参考Martino and Zaritzky（1986）,间接方法测定组织中的冰晶大小【10】。主要过程如下:样品用固定液Carnoy试剂(30%氯仿，60%无水乙醇，10%冰乙酸)固定18 h以上，在固定约12 h时进行修整，将样品修整为5×5×3 mm3片状；对照样则于室温下固定，固定时间2 h左右；固定后的样品便可转移到室温环境下操作,转入无水乙醇中脱水(2 h),正丁醇脱水(2 h),正丁醇过夜；在60 ℃条件下,石蜡透蜡(三次换蜡),包埋；切块后,手摇切片机切出的切片,HE常规染色(haematoxylin- eosin)。切片观察使用OlympusBX41生物显微镜(带有数字摄像头及图像分析软件Imgaeporplus4.0和5.0),拍摄组织图像。