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2.2.6 测定β-环糊精法中的环糊精残留量
2.2.6.1 样品的预处理
准确称取25～50mL于250mL的容量瓶中→加入50mL水，慢慢加入5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钾溶液→加水至刻度，混匀，沉淀→静置30min，用干燥的滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用→吸取50mL滤液50mL于100mL容量瓶中，加入5mL6mol/L的盐酸溶液→68～70℃水浴中加热15min，冷却后滴加甲基红指示剂→用20%氢氧化钠溶液中和至中性，加水至刻度，摇匀。
2.2.6.2 碱性酒石酸铜溶液的标定
吸取5mL碱性酒石酸铜甲液及5mL乙液置于150mL锥形瓶中→加水10mL水及玻璃珠两粒→从滴定管滴加约9mL乳糖/葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁热以每两秒一滴的速度继续滴加乳糖/葡萄糖标准溶液→直至溶液的蓝色刚好褪去为终点→记录消耗乳糖/葡萄糖标准溶液的总体积→平行测定三份→取其平均值→计算每10mL碱性酒石酸铜溶液相当于乳糖/葡萄糖的质量（mg）
2.2.6.3 试液预测
吸取5mL碱性酒石酸铜甲乙液置于150mL锥形瓶中→加水10mL和玻璃珠两粒→控制在2min内加热至沸→趁热以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，并保持沸腾状态→待溶液颜色变浅时，以每两秒一滴的速度滴定→直至溶液蓝色刚好褪去时为终点→记录样液消耗体积→平行测定三份
2.2.6.4 试液测定
吸取5mL碱性酒石酸铜甲乙液置于150mL锥形瓶中→加水10mL和玻璃珠两粒→从滴定管滴加比预测体积少1mL的试液至锥形瓶中，使在2min内加热至沸→趁热一每两秒一滴的速度滴定→直至溶液蓝色刚好褪去时为终点→记录样液消耗体积→平行测定三份
2.2.6.5 β-环糊精残留量计算
β-环糊精残留量（%）=（总糖含量-牛奶中的乳糖含量）/β-环糊精添加量
w= %=
式中w—总糖质量分数
ｍ1—直接滴定法中10mL碱性酒石酸铜相当于葡萄糖的质量（mg）
m—样品质量(g)
V1—样品处理液的总体积（mL）
V2—测定总糖含量取用水解液的总体积（mL）
X=
X—样品乳糖含量(g/100mL)
m1—10mL碱性酒石酸铜溶液相当于乳糖的质量(mg)
m2—样品的总量（mL）
V—测定时平均消耗样品液的体积（mL）
3.结果与讨论
3.1 胆固醇标准曲线绘制
根据GB/T5009.128- 2003 ，吸取胆固醇标准使用液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL分别于10mL试管中，在各管内加入冰乙酸使体积皆达4mL,沿管壁加入2mL铁矾显色液，混匀，在15min～90min内，在560nm～575nm波长在比色。以胆固醇标准浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标做标准曲线。所生成的标准曲线图见图3-1。
图3-1 胆固醇标准曲线图
3.2 高效液相色谱法测定牛奶中胆固醇含量的结果
根据正交试验和响应面试验结果，挑取胆固醇脱除率最高的两组反应条件，将处理过后的低胆固醇牛奶，参照GB/T22220-2008，使用高效液相色谱法测定其剩余的胆固醇含量，其最低检出限为2.6mg/100g。其色谱图和测定结果如下：
图3-2 胆固醇标样图谱
配置浓度分别为0.1、0.2,、0.3、0.5mg/mL的标准溶液分别取10μL注入高效液相色谱仪中，上图为胆固醇标样图谱在5.5min时出峰。
图3-3 样品峰值图
由图3-3可见，样品的峰面积很小，代入计算公式后其对应的牛奶胆固醇含量趋近于0。
表3-1 高效液相色谱法检测结果表
反应温度（℃） 搅拌时间(min) 离心转速（rpm） 胆固醇含量（mg/100g）
60 60 10000 未检出