1。1。2 实验试剂

丙烯酰胺标准品（纯度＞99。9%）；甲醇（色谱纯）；CarrezⅠ试剂 15g K4[Fe（CN）6]·3H2O溶于100mL水；CarrezⅡ试剂 30g ZnSO4·7H2O溶于100mL水；试验中所用水均为超纯水。

1。1。3 实验仪器文献综述

氮吹仪；超声波清洗机；Waters 高效液相色谱仪（配有2874可变波长紫外检测器）；5 C18-PAQ色谱柱（4。6ID×250mm）。

1。2 实验方法

1。2。1 待测样品的提取

样品的前处理方法是：均质并取样→除脂→抽滤并干燥→超声清洗→去除蛋白质→离心→过膜→高效液相色谱法检测→数据处理 

（1）取实验室自制的油炸鸡块，用绞肉机将鸡块外部的裹衣切碎均质，称取5。0g均质后的样品至50mL离心管中制备成裹衣待测样品。另外还要将鸡肉切碎称取5。0g至新的50mL离心管中制备成鸡肉待测样品。 

（2）每个样品管加入20mL正己烷，拧紧盖子，摇匀。放入摇床设置参数为温度25℃，转数为150r/min，振荡15min。然后将样品管放置于离心管架上静置10min。 

（3）对静置后的样品进行抽滤，抽滤完成后取滤纸上的滤渣，用氮吹仪干燥后，放入新的50mL离心管中。 

（4）用100mL量筒量取20mL超纯水，倒入样品管中，摇匀放在离心管架上。 

（5）将样品管连同离心管架放入超声波清洗器（功率220W，频率50KHZ）中，设置超声时间为15分钟。 

（6）每个样品管中用移液器各加入卡瑞Ⅰ试剂500µL，卡瑞Ⅱ试剂500µL摇匀，振荡（25℃  150r/min）5分钟。 

（7）样品离心：离心条件为4℃，10000r/min，离心10分钟。

（8）离心后用注射器抽取适量中层清液(尽量避开上层油层)过0。22µm滤膜，于4℃冰箱中贮存备用。

（9）用高效液相色谱法检测样品中丙烯酰胺的含量。

1。2。2 进样条件的选择

进样量的选择    本实验选取进样量分别为8,10,12μL进行检测分析，比较检测结果。

流动相比例的选择

    由于丙烯酰胺是极性较强的物质，所以选择水和甲醇作为本实验检测的流动相。流动相甲醇：水的比例分别为0：100，5：95，10：90，15：85。比较各检测条件的色谱图，选取峰形最好，然后再继续进一步优化，最后确定最合适本实验的流动相比例。

1。2。3 标准溶液的配制与标准品曲线绘制

（1）精确称取丙烯酰胺标准品0。1000g，用水溶解后倒入100mL的棕色容量瓶中，准确定容至刻度，加塞充分摇匀，配制成浓度为1。0mg/mL的标准液，4℃冰箱保存，备用；

（2）取1mL 1。0mg/mL标准品溶液于100mL的棕色容量瓶中，准确定容至刻度，加塞充分摇匀，配制成10μg/mL的标准液，4℃冰箱保存，备用；

（3）分别取100μg/mL的标准使用液1、5、15、20、25mL于100mL的棕色容量瓶中，准确定容至刻度，加塞充分摇匀，制成浓度梯度为0。1、0。5、1、2、2。5μg/mL的标准溶液，用孔径0。22μm水系滤膜过滤，置于进样瓶中。按1。2。2色谱条件进行测定，作出峰面积对浓度的标准曲线，并求出直线回归方程。

1。2。4精密度实验及方法的检出限

取浓度为1μg/mL丙烯酰胺标准品溶液，连续检测6次，计算相对标准偏差（RSD），确认该检测方法是否具有良好的精确度。

选取浓度为0。01、0。008、0。006、0。004、0。002mg/L 的丙烯酰胺标准品溶液，采用上述选取的液相色谱的条件进行测定，当信噪比S/N=3时，比较检测结果。选择本实验检测方法能检测出来的最小标准品浓度即为本检测方法的检出限。来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*