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    王旭[21]等人在采用高效液相色谱法测定食品中的优尔椒素和二氢优尔椒素的实验中,先利用超声波辅助甲醇-四氢呋喃(1+1)提取样品中的优尔椒素和二氢优尔椒素,然后采用Agilent 1100高效液相色谱仪,在C18色谱柱(150×4.6mm,5μm);流动相为甲醇:水(80:20),流速为0.6ml/min的条件下,对优尔椒素、二氢优尔椒素标样和样品进行荧光检测(Ex=229nm、Em=320nm)。结果表明,优尔椒素含量在0.13~160mg/L之间,二氢优尔椒素含量在0.04~160mg/L之间;峰面积与待测物浓度呈良好的线性关系,相关系数为1;RSD为1.36%~4.79%,回收率在70.50%~100.07%之间。
    谷岩[22]等人也对优尔椒中优尔椒碱和二轻优尔椒碱进行过深入研究。建立了一套以高效液相色谱为基础的检测方法。先对样品优尔椒用无水乙醇进行萃取处理。然后通过HPLC分离。在最佳色谱条件下:ZORBAX SB–C18柱(250 mm×4.6mm,5μm);二极管阵列检测器(DAD);检测波长280 nm;流动相采用甲醇:水(65:35);流速为1.0 mL/min。优尔椒碱、二氢优尔椒碱的加标回收率分别为 94.1%~96.8% 、92.6%~95.0% ,测定结果的相对标准偏差小于2.0%(n=11)。该法实现了 25 min 内对优尔椒碱、二氢优尔椒碱的同时测定。
    任召言[23]等人在其优尔椒精的精制及优尔椒素的HPLC测定的研究中,先通过物理化学性质对优尔椒油树脂进行精制,然后采用日本岛津LG-CA高效液相色谱仪,在supelcosil C18反相色谱柱(15cm X 6mm)下,通过waters900紫外可见检测器对其分离检测。流速为0.5ml/s,流动相水(含1% 磷酸):乙腈=60:40。其优尔物质洗出顺序为降二氢优尔椒素(NDC)、优尔椒素(C)、二氢优尔椒素(DC)、高优尔素(HC)和高二氢优尔椒素(HDC)。
    赵仁邦[24]等人对优尔椒素进行过研究,他们采用高效液相色谱法,Hypersil  BDS C18色谱柱进行分析,通过紫外检测器在280nm出检测。但对样品的前处理,他们使用的是甲醇超声溶解的。其结果,在采用甲醇:水(85:15)的流动相,流速0.6ml/min体系下,线性回归方程是Y=11.2 +7.97,相关系数为r=0.9999,样品的精密度RSD=2.6%,平均回收率是95.71%。
    童庆宣[34]等人对快速测定优尔椒树脂油中优尔椒素含量进行研究,他们采用95%乙酸钠饱和乙醇溶液浸泡的方法简单处理树脂油,使用日本岛津的LC-4A型高效液相色谱仪,用甲醇:水:二氧优尔环:乙腈:2%高氯酸=50:30:11.8:8:0.2为流动相,流速1.2ml/min,室温,在紫外光波长280nm下检测,可在8分钟内分离优尔椒素和类优尔椒素。
    孙进平[35]等人使用RP-HPLC法对优尔椒碱进行研究,采用日本岛津产高效液相色谱仪,YMS ODS色谱柱,流动相甲醇:水(0.1%磷酸)=75:25,流速0.6ml/min,柱温40℃,检测波长280nm的色谱条件进行检测。其研究结果,既可以定量分析提纯的优尔椒样品,也可以直接检测未提纯的优尔椒样品。
       用HPLC方法检测天然优尔椒碱的色谱条件对比:
    表1 色谱条件对比
    参考文献    色谱柱    流动相    优尔椒素出峰时间/min
    18    Kromasil-C18    甲醇-水(80:20)    6.5
    27    Kromasil C18    乙腈:水(50:50)    14
    20    Agilent ODS    甲醇:四氢呋喃(1:1)    18
    21    C18    甲醇:水(80:20)    4.6
    22    ZORBAX SB–C18    甲醇:水(65:35)    15
    23    supelcosil C18    水(含1% 磷酸):乙腈=60:40    15
    24    Hypersil  BDS C18    甲醇:水(85:15)    5
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