镰刀菌毒素的暴露情况在欧洲镰刀菌毒素是谷物中非常频繁的污染物。Ute Meister[17]历时八年(2000-2007)收集位于勃兰登堡州(德国)的综合种植和有机种植的407份小麦样品和510份黑麦样品,通过高效液相测定DON和ZEA毒素,研究结果表明有机种植的小麦和黑麦中DON和ZEA的发生频率和水平明显比综合种植的第低。Sylvie Beláková等人[18]在2008至2011年间对捷克地区325个产麦芽的大麦样本中产DON、ZON、T-2和HT-2的情况进行测定,发现在2009年的谷物中毒素产量最大。他们认为谷物中DON的产生很大程度上依赖于产地和生产年份的气候情况。Jelka Pleadin等人[19]从克罗地亚优尔个不同地区采集了181份玉米、小麦、大麦和燕麦样品,采用ELISA测定DON、ZEA、FUM和T-2毒素的浓度。结果表明玉米是受污染最严重的,在所有样本中DON阳性样本有52.5%、ZEA:40.5%、FUM:37.5%、T-2:33%。22474
在我国谷物中关于镰刀菌毒素的污染也有不少。王金勇等人[20]发布的2013年1-7月中国玉米及小麦霉菌毒素检测报告中指出玉米中呕吐素和玉米赤霉烯醇的污染严重;小麦和麸皮中污染最为严重的是呕吐素,玉米赤霉烯醇的污染情况没有在玉米中严重。李凤琴,于钏钏等人[21]于2007--2008年在我国7个省(市、自治区)采集了446份玉米、小麦等样品,用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC,MS/MS)方法检测样品中DON-3-G及多组分真菌毒素(包括DON、ZEN、NIV等)的污染状况。结果表明:在所测的7个区域中的小麦样品中DON的检出率高达88%,但未超过限量标准,22.9%样品ZEA阳性,6份超过限量标准。小麦样品中存在DON衍生物污染,以DON-3-G最为严重。玉米样品中DON的检出率为50.5%,有7份来自河南的样品超标,41.7%样品ZEA阳性,其中的43.5%超标,24.5%样品检出AFB1,其中64%超标。玉米样品中同样存在DON衍生物。论文网
镰刀菌毒素的检测方法
样品前处理的方法一般有液-液萃取法、固相萃取法、超临界流体萃取法、免疫亲和色谱法等。液-液萃取法是利用各溶质溶解度差异,采用不同溶液进行萃取的方法;固相萃取近年来使用较多,采用不同物质作为固定相如活性炭、硅胶、氧化铝、C18等,填料物质在一定程度上影响检测的回收率;超临界流体萃取法是一种能同时实现提取和净化的方法,且不需使用大量有机溶剂,但是回收率不高;免疫亲和色谱法同固相萃取法在样品的前处理方面应用较多,免疫亲和色谱柱对净化效果很大程度上依赖于单克隆抗体的亲和能力[22]。固相萃取法、超临界流体萃取法和免疫亲和色谱法一般用于毒素的净化,在此之前通常采用液-液萃取法进行粗提。
镰刀菌毒素的检测方法通常包括薄层色谱法、酶联免疫分析法、气相色谱法、高效液相色谱法和色谱-质谱联用技术等。薄层色谱法是一种经典的检查方法,也是国家标准所推荐的,该法方便快速简单但不够准确。酶联免疫分析法是一种非常常用的快速检测方法,但其检测水平还在mg级。气相色谱虽然可对毒素进行微量测定,灵敏度高、分析快速,但其前处理过程用时长,较为繁琐复杂,仪器成本高等局限性使其使用不广泛。色谱-质谱连用法可靠性强灵敏度高,但其前处理同样较为繁琐,仪器造价高,所以一般在研究中心较为普遍使用[23]。
LC-MS/MS对谷物及其制品中真菌毒素检测具有可靠性好,检测速度快、灵敏度高的优点,可适用于复杂基质样品中多组分真菌毒素的确认和准确定量检测。Berthiller F等人[24]将人工或自然受污染的小麦经提取净化后使用LC-MS /MS分析其脱氧雪腐烯醇葡萄糖苷。不同于GC-MS,运用LC-MS样品不用被衍生。LC-MS最常用的离子化来源是电喷射(ESI)和气压化学离子化(APCI)。ESI适用于强极性混合物,高分子,蛋白质,多肽和低聚核苷酸,而APCI适用于不易挥发,热稳定的中性或弱极性混合物。LC-MS一般需要处理样品来去除杂质和有可能堵塞液谱膜的物质,最近也有不用清理样品的方法[25]。
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