6）DMEM高糖培养基                  塞默飞世尔生物化学制品（北京）有限公司

7）甘油三酯测定试剂盒               浙江东瓯诊断产品有限公司

8）葡萄糖测定试剂盒                 上海荣盛生物药业有限公司

9）工业级乙醇                       杭州汇普公司

10）MTT                              Amresco 

11）胰蛋白酶(Trpsin)                 Solarbio

12）青／链霉素双抗                   Solarbio

13）二甲基亚砜(DMSO)                  Sigma

14）3一异丁基一1一甲基黄嘌呤(IBMX)  Sigma

15）地塞米松(DEX)                     Sigma

16）lnsulin                           Sigma

17）PBS(磷酸盐缓冲液)                 Cwbio

18）10cm培养皿                        Fisher

1。3  主要试剂的制备

1）NBS培养液：50 mLNBS与5 ml青／链霉素双抗加入450 mL DMEM 培养基，配成血清浓度为10％的溶液，4℃储存。

2）FBS培养液：5O mLFBS与5ml青／链霉素双抗加入450 mL DMEM培养基，配成血清浓度为10％的溶液，4℃储存。

3）诱导剂的配制：①IBMX:称取10 mg IBMX，溶于 0。9 ml DMSO, 配置成终浓度为 0。5 M的母液，-20℃保存。②DEX：称取DEX 2mg, 溶于2 ml 无水乙醇中,再加入 8 ml PBS，过滤，配置为浓度即为1mM的母液，-20℃保存。③Insulin：取10 mg胰岛素至于2 ml EP管中，加超纯水500 μl，涡旋振荡，再加0。2 M HCl（50-100μl），最后加超纯水至1 ml，0。22 μl微孔滤膜过滤除菌，终浓度为10 mg/ml，-20度保存。

3）MTT溶液：每次实验称取MTT用PBS溶解，使MTT浓度为2μg/μL，用锡箔纸在4℃ 下避光保存，一周内使用。

4）油红O染液：通常每次实验取6-8 mL油红溶液，临用以油红O：超纯水为3：2稀释，过滤后2h内使用。论文网

5）葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法试剂配制：将R1试剂和R2试剂等量混合均匀，现配现用。实验方法

2。实验方法

2。1   腺梗豨莶草水提物（XXC-W)的提取

2。2   3T3-L1细胞的培养与诱导分化与XXC-W的活性鉴定

（1）3T3-L1细胞的培养与传代：培养皿中加入用含10％NBS与1%双抗的DMEM高糖培养基（CM）10 mL，置于37。C、5％CO2培养箱内培养；当细胞贴壁生长到培养皿约85％～95％时,传代。加入胰蛋白酶消化液约400μl，在倒置显微镜下观察细胞形态细胞近乎缩成圆形、细胞之间间隙增大、颜色变亮，此时加入10 mL CM培养基， 800 r/min离心5 min，弃去上清，加入1 ml CM，血球计数板上进行计数；然后接种200000细胞到新的培养皿中放入培养箱中继续培养。

（2）诱导分化：本实验采用“鸡尾酒法”即用IBMX、DEX和Insulin诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的3T3-L1脂肪细胞。方法如下：

1)接种：将3T3-L1每孔约5×104个细胞接种于24孔培养板，每孔加入1ml CM培养基，在37℃、5％CO2培养箱中培养;

2)加诱导剂I（InducerⅠ）:待细胞密度长至80-90%，即约融合2天后，每孔加入终浓度为0。5 mmol/L IBMX、1 umol/LDEX和Insulin 10ug/ml的含10%FBS1%双抗的高糖DMEM培养；