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摘要：采用组织分离法从重阳木和银杏分离出277株内生真菌。以大肠埃希杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为指示菌，使用“菌落覆盖法”初筛获得34株内生真菌至少对一种指示菌表现不同程度抑菌活性，并用“牛津杯法”测定内生真菌培养物抑菌活性。对2株抑金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）活性最强的内生真菌进行形态学鉴定，确定其中一株CYM-S4为黑曲霉，另一株YX-G-L3进一步采用分子生物学鉴定并申请获得登录号为KJ855517，通过形态和分子生物学方法确定为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides.38409
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毕业论文关键词: 银杏；重阳木；内生真菌；抑菌活性
Studies on Antimicrobial Animal pathogenic bacteria Activity of Endophytic Fungi Isolated From two medicinal plants
Abstract: With the technique of tissue seperating ,227 strains of Endophtic fungi were isoloated from Bischofia polycarpa and Ginkgo biloba. E.Coli and Staphylococcus aureus were indicatior bacteria, 34 strains of endophytic fungi were screened. The anti-bacteria activity of the 34 strains of endophytic fungal liquid culture was measured by the “Oxford cup” method. Indentification of two strains of endophytic fungi were carried with monphology and phylogenic analysis. Strain CYM-S4 was determined to be Aspergillus niger, strainYX-G-L3( GenBank number is KJ855517). were as Colletotrichum gloeosporioides.
Keyword: Ginkgo biloba.; Bischofia polycorpa ;Endophytic Fungi ; Antimicrobial activity
目录
引言： 1
1 材料与方法 2
1.1材料 2
1.1.1 植物样本来源 2
1.1.2 培养基 2
1.1.3 指示菌菌种 2
1.1.4主要药品与试剂 2
1.2 主要仪器与设备 3
1.3方法 3
1.3.1 植物样本的表面消毒方法建立 3
1.3.2 内生真菌的分离与纯化 4
1.3.3抑菌活性内生真菌的筛选 4
1.3.4 内生真菌抑菌活性的测定 4
1.3.5 高活性菌株鉴定 4
2结果及分析 5
2.1表面灭菌条件筛选 5
2.2不同部位内生真菌的数量及地区分布 6
2.3抑菌内生菌的筛选 6
2.4高抑菌活性菌株分类鉴定 9
2.4.1菌株CYM-S4和YX-G-L3菌落形态观察 9
2.4.2 菌株YX-G-L3 rDNA基因序列扩增产物分析 10
2.4.3 菌株YX-G-L3的rDNA基因序列测定 10
2.4.4 菌株YX-G-L3的系统发育分布 11
3.讨论 11
致谢 12
参考文献： 13
引言：
植物内生菌（Endophytes）是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官的细胞间隙或细胞内的微生物，被感染宿主植物（至少暂时）不表现外在的病症，可通过组织学方法或严格表面消毒的植物组织中将其分离出或通过DNA扩增方法证明［1］。19 世纪中叶，植物内生菌“Endophyte”率先由DeBary ( 1886)提出 ，而有关内生真菌的研究始于19 世纪末，Guerin ( 1898 )在野黑麦（ Lolium arvers）中分离获得了植物内生真菌［2］。近几年全球对植物内生真菌的研究报道较多，研究方向主要集中于植物内生真菌种群遗传结构多样性和活性物质两个方面［3-5］ ，植物内生真菌能产生多种具有不同抑菌活性的物质，对动物和人病原菌有抑菌活性。植物内生真菌在与宿主长期生存交流的过程中能够产生与宿主相同或相似的物质，一些学者有效利用此特性对银杏内生真菌展开研究 ,从发酵培养液和菌丝体中分析提纯出了黄酮类和内酯类物质[ 6-7] 。由于真菌具有生长快、易培养、易控制、生产成本低等特点可作为优良生物反应器，利用发酵工程技术获得活性产物，容易实现大规模工业化生产，应用前景十分广阔。