本课题组前期研究发现，使用大豆玉米培养基发酵的G3菌次级代谢产物对MDA-MB-231乳腺癌细胞具有抗肿瘤活性。本实验拟在前期工作基础之上，选择其他培养基：高氏合成一号、PD液体培养基，以及ISPII发酵培养，比较发酵产物的蛋白浓度及抗肿瘤活性，为活性成分分离纯化的研究提供依据。

2 材料与方法

2.1材料

2.1.1放线菌

放线菌G3：分离自新疆格尔木的土壤。由江苏师范大学江苏省药用植物生物技术重点实验室提供

2.1.2乳腺癌细胞

MDA-MB-231；MCF-7：由江苏师范大学江苏省药用植物生物技术重点实验室提供

2.1.3试剂

葡萄糖、可溶性淀粉、酵母浸膏、麦芽浸粉、蔗糖、乙酸乙酯、乙醇由国药集团化学试剂有限公司提供；DMSO天津市博迪化工有限公司；G250染色液和蛋白标准（5mg/mLBAS）上海生工生物工程有限公司；两性霉素和抗生素，华北制药集团生产；胰酶，北京经科试剂公司生产；胎牛血清，天津TBD公司生产；Alamar Blue，上海翊圣生物科技有限公司。

2.1.4仪器论文网

表2-1 仪器列表

仪器名称 型号 厂家

电热恒温培养箱 DNP-9052 上海精密实验设备有限公司

电子天平 MP4002 上海舜宇恒平科学仪器有限公司

电子天平 sartoriusBSA224S 奥多利斯科学仪器（北京）有限公司

恒温培养振荡器 ZWY-2102 上海智城分析仪器制造有限公司

全温振荡培养箱 HZQ-F400 太仓市华美生化仪器厂

高频数控超声波清洗器 KQ500-TDE 昆山市超声仪器有限公司

CO2恒温培养箱 HEPA 南京宝诚生物技术有限公司

洁净工作台 Boxun 上海博讯实业有限公司医疗设备厂

液氮罐 YDS-10 郑州万博公司

续表2-1

仪器名称 型号 厂家

高压灭菌锅 MLS-3750 上海迭戈生物科技有限公司

电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9123A 上海精宏实验设备有限公司

旋转蒸发仪 EYELA N-1100 上海爱明仪器有限公司

循环水真空泵 SHZ-DIII 上海予英仪器有限公司

水浴锅 EYELA SB-1100 上海爱明仪器有限公司

离心机 5430R 德国eppendorf公司

高速冷冻离心机 Avanti J-26 XPI 上海拜力生物科技有限公司

加热混匀仪 Mixer-100H 德国eppendorf公司

艾科浦超纯水机