溶菌肉汤培养基（lysogeny broth，LB）：于1000mL的去离子水中，加入胰蛋白胨10g、酵母粉5g以及NaCl 10g，搅拌均匀后分装至4个锥形瓶中，加塞，灭菌备用。

捷克八溶剂系统[10] ：(1)水饱和的正丁醇；（2）水饱和的正丁醇，其中含有2%的对甲苯磺酸；（3）正丁醇：乙酸：水=2：1：1；（4）水饱和的正丁醇，内含2%的六氢吡啶；（5）正丁醇饱和的0。5mol/L，pH 7。0的磷酸缓冲溶液；（6）正丁醇饱和的水，内含2%的对甲苯磺酸；（7）苯：甲醇=4：1，本系统所用滤纸先用0。5mol/L，pH 7。0的磷酸缓冲溶液处理后晾干；（8）甲醇：水=3:1，水内含3%NaCl，本系统所用滤纸先用5% Na2SO4处理晾干后使用。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

2。4实验材料

三角瓶（规格：蜀牛，50ml），接种针，涂布棒，一次性塑料培养皿，移液器，签字笔，无菌96孔板，烧杯，新华3号滤纸

2。5 实验方法

2。5。1内生真菌发酵

将内生真菌菌株从菌种库中取出，在超净工作台中进行无菌操作，将内生真菌菌株接种于PDA培养基上，置于25℃培养箱中，3-7天后，从新长出的菌落边缘切去5mm×5mm大小的菌饼，接种至含20ml马铃薯葡萄糖液体培养基的三角瓶中（容量50ml），25℃下静置培养21天，发酵量共4L。

2。5。2 内生真菌代谢产物的粗提取

将内生真菌发酵液过滤，上清液用旋转蒸发仪浓缩至200ml，向浓缩液中加3倍体积的无水乙醇，振荡充分后，再次过滤，取上清液，用旋转蒸发仪进行浓缩处理，浓缩液经离心冷冻浓缩仪浓缩干燥；获得粗提物。准确称量粗提物，用无菌水将其溶解，配成浓度为100 mg/ml的溶液