Keyword: Nitrile hydratase；Irbesartan；Screening； Molecular docking; Recombinant protein 

目    录

1  引言 5

2  实验部分 9

2。1实验试剂 9

2。2实验仪器 10

2。3重组腈水合酶的培养过程 12

2。3。1 培养基和实验试剂配置 12

2。3。2 菌种培养诱导 13

2。3。3  通过腈水合酶催化1-戊酰胺基环戊腈合成厄贝沙坦中间体 14

2。3。4  腈水合酶的表达分析 15

3  结果与讨论 16

3。1 对合成过程的分析 16

3。1。1对于筛选腈水合酶的分析 16

3。1。2对于蛋白表达的分析 18

3。2 计算机模拟 20

3。2。1 同源建模 20

3。2。2 分子对接及作用力研究 21

4  结论 22

参考文献 23

致谢 25

1  引言

厄贝沙坦（Irbesartan）主要针对原发性高血压还有合并高血压的2型糖尿病肾病的治疗，对于心脏疾病，心脏中风，糖尿病性神经病和充血性心脏疾病的治疗也是有效的[1]。厄贝沙坦为血管紧张素II（Ang II）的受体抑制剂，一种非肽类长效血管紧张素II受体拮抗剂，由法国Sanofi公司研制，1997年开始在英国上市，能抑制Ang I转化为Ang II，特异性地拮抗血管紧张素转换酶I受体（AT1），选择性阻断Ang II与AT1受体结合，抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用。

血管紧张素II受体阻断剂（ARBs），例如厄贝沙坦结合血管紧张素II型1（AT1）受体具有高亲和力，抑制血管紧张素II的血管平滑肌的作用，最终使动脉血压降低。厄贝沙坦，由于对非肽类血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂的高选择性和强效的的代谢，已在人类中进行了大量研究[2]。论文网

厄贝沙坦具有经由AII受体亚型1（AT1），介导大多数AII的已知生理活性的特异性，选择性非竞争性拮抗抑制血管紧张素II（AII）的活性[3]。血管紧张素II型1（AT1）受体在血压和电解质平衡的调节中起到了关键作用，并参与特定摄食行为的控制。厄贝沙坦是最近开发的血管紧张素AT1受体拮抗剂和其他同类拮抗剂相比，目标受体显示具有更高的亲和力。[4]

合成方法1 (Scheme 1。) [5,6]：制备厄贝沙坦的高级中间体（1）由4'-溴甲基-联苯-2-腈（3）与2-丁基-1缩合，3-氮杂螺[4,4]壬-1-烯-4-酮盐酸盐（4）用氢化钠（NaH）当做碱和二甲基甲酰胺（DMF）作为溶剂介质。在此方法中将NaH用作碱，需要极其小心，因为是一个放热反应，是需要在惰性气氛下进行的反应，对于湿气高度敏感，这是不安全的，不适合生产商业规模。而且DMF通过皮肤容易被吸收，非常刺激皮肤和黏膜。并且高沸点溶剂如DMF中除去是困难的，不经济的。此外，该产物通过柱色谱纯化，这在商业上是不可行的，所用试剂和溶剂也不适合大规模生产。

 Scheme 1。 方案一采用NaH作为碱性催化剂，用DMF作为溶剂反应

还有方法二（Scheme 2。），使用甲基三辛基氯化铵，甲苯为相转移催化剂以及二氯甲烷在不同浓度的氢氧化钠水溶液中进行缩合。这些方法的缺点是多次萃取，酸碱处理，冗长乏味，并且程序隔离[7]。