溶解芦丁粉末的溶剂为乙腈：水=3:7（按色谱条件自定义），共配10 mL，量取3 mL的乙腈和7 mL的水（0。1％乙酸），放入50 mL离心管待用。取5个PU管，按顺序编号为1-5号，称量0。013 g的芦丁粉末放入1号PU管，加入1。3 mL的溶剂，即为母液。用移液枪从1号PU管中吸取0。1 mL加入2号PU管后，再吸取0,9 mL溶剂于2号PU管，混匀；用移液枪从2号PU管吸取0。1 mL加入3号PU管后，再吸取0。9 mL溶剂于3号PU管中，混匀；按此方法稀释成5个浓度梯度，相邻浓度梯度浓度相差10倍。1-5号浓度分别为：10 mg/mL、1 mg/mL（1/10）、100 μg/mL（1/100）、10 μg/mL（1/1000）、1 μg/mL（1/10000）。各取100 L放入进样瓶中，编号，用HPLC检测出图谱。根据它们之间的浓度倍数关系，分析峰面积和浓度关系。

1。5 模拟芦丁在血液中的代谢，检测其含量，计算回收率，选择最佳口服浓度

    从小鼠眼球处分别取血0。5 mL放入2只PU管中，标号A、B。A管立溶解芦丁粉末的溶剂为乙腈：水=3:7（按色谱条件自定义），共配10 mL，量取3 mL的乙腈和7 mL的水（0。1％乙酸），放入50 mL离心管待用。取5个PU管，按顺序编号为1-5号，称量0。013 g的芦丁粉末放入1号PU管，加入1。3 mL的溶剂，即为母液。用移液枪从1号PU管中吸取0。1 mL加入2号PU管后，再吸取0。9 mL溶剂于2号PU管，混匀；用移液枪从2号PU管吸取0。1 mL加入3号PU管后，再吸取0。9 mL溶剂于3号PU管中，混匀；按此方法稀释成5个浓度梯度，相邻浓度梯度浓度相差10倍。1-5号浓度分别为：10 mg/mL、1 mg/mL（1/10）、100 μg/mL（1/100）、10 μg/mL（1/1000）、1 μg/mL（1/10000）。各取100 L放入进样瓶中，编号，用HPLC检测出图谱。根据它们之间的浓度倍数关系，分析峰面积和浓度关系。

即加入20 L 1 mg/mL的芦丁，混匀；B管也立即加入20 L 10 mg/mL的芦丁，然后A、B管离心10 min，转速5000，温度为4 ℃。离心完用注射器吸取上清液100 L，套上一次性针式过滤器过滤，后分别加400 L乙腈沉淀蛋白质，再离心10 min，转速5000，温度4 ℃，离心结束后用移液枪各吸取100 L上清液放入进样瓶中检测，记录芦丁的峰面积，以同浓度芦丁标准品的峰面积为标准，将Y代入标准曲线计算芦丁浓度，计算其绝对回收率。来:自[优.尔]论,文-网www.youerw.com +QQ752018766-

1。6 小鼠口服芦丁后检测其不同时间段在血液中的含量

选8只小鼠，体重分别为36。9 g、32。9 g、32。3 g、32。3 g、29。7 g、31。2 g、27。2 g、30。3 g，分别标记为A1、B1、A2、B2、A3、B3、A4、B4，选用浓度为1 mg/mL的芦丁（精密称量芦丁粉末0。01 g，用10 mL生理盐水溶解，混匀）按0。2 mL/10 g给小鼠灌胃，分别灌胃0。74 mL、0。66 mL、0。65 mL、0。65 mL、0。59 mL、0。62 mL、0。54 mL、0。61 mL。A1、B1立即（实际上是过了5 min）眼球取血0。5 mL，离心10 min，后吸取上清液用一次性针式过滤器过滤，取100 μL滤液加400 μL乙腈混匀，离心10 min，用移液枪吸取10 μL上清液放入进样瓶，过30 min给A2、B2眼球取血，后面步骤与A1、B1相同，过60 min给A3、B3眼球取血，过90 min给A4、B4眼球取血，后续处理方法相同，后全部用高效液相色谱法检测。

2。实验结果及分析

2。1 芦丁HPLC色谱图

    配制1 μg/mL、10 μg/mL、100 μg/mL、1000 μg/mL、10000 μg/mL芦丁水溶液，处理后测定