2。2。2位点选择

     ADCY3基因的遗传变异资料从Hapmap数据库（http://hapmap。ncbi。nlm。nih。gov/）中获得，采用Haploview软件的Tagger功能，依据中国人群中的最小等位基因频率＞5%，并且与区段内其他SNP的连锁不平衡系数均＞0。8的原则，筛选Tag SNP。本研究最终获得12个Tag SNP，见表1。

2。2。3实验室检测

    由上海捷瑞生物工程有限公司的专业技术人员采用酚-氯仿法进行DNA抽提，采用连接酶检测反应技术（ligase detection reaction，LDR）进行SNP分型检测，实验采用到的引物和探针序列详见表1。

2。2。4实验过程

    （1）PCR扩增：采用东胜EDC-810PCR仪，扩增体系包括DNA样本1 μl，10×PCR缓冲液1。5 μl ，25 mmol/LMgCl2 1。5 μl，10 mmol/L脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）0。3 μl，10 mmol/LPCR引物每条0。15 μl，5 U/μl Tap酶0。3 μl，加ddH2O至15 μl 。扩增条件为94 ℃变性3 min，94 ℃ 15 s，55 ℃ 15 s，72 ℃ 30 s，循环35次，72 ℃退火延伸3 min。（2）测序反应：采用东胜EDC-810PCR仪进行连接反应，反应体系包括PCR产物3 μl，加10×Tap DNA连接酶缓冲液1 μl，Tap DNA 连接酶5 U，10 pmol/L探针每条0。01 μl，加ddH2O至10 μl。条件为94 ℃ 30 s，56 ℃ 3 min，循环30次。连接反应结束后，取1 μl连接产物，8 μl上样缓冲液，95 ℃ 变性3 min，立即冰水浴，最后上ABI3730XL测序仪测序。论文网

2。3统计学分析

   应用Epidata 3。1软件进行数据录入与核查纠错，采用SPSS 20。0软件进行统计分析。（1）描述性分析：对年龄等符合正态分布的连续型变量采用均数±标准差（mean±SD）进行描述，对血压、血脂指标、体重指数等非正态分布连续型变量采用M（Q1，Q3）进行描述，对职业等分类变量采用频数和构成比进行描述。（2）单因素分析：满足正态分布的连续型变量采用t检验，不满足正态分布的连续型变量采用非参数检验，对分类资料采用χ2检验；采用Peason χ2检验比较各位点基因型在对照组中的分布是否满足Hardy-Weinberg平衡定律。（3）采用Logistic回归分析ADCY3基因及饮食因素与脂肪肝的关系，计算调整了年龄、性别等因素后的OR值及其95%CI。以P＜0。05为差异有统计学意义