磷酸盐吸附蛋白细菌细胞表面展示体系的构建(7)
时间:2017-03-29 20:42 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
（2）1%接种量，接种新鲜液体LB培养基，37 ℃ 180 r/min振摇培养3~4小时(OD600 0.6~0.8)，使菌体到达对数生长期。 （3）分光光度计检测OD值。吸光度设为600。吸取1 mL 培养3~4小时的菌液，4 ℃ 8000×g 离心1 min，再加入1 ml 新鲜的LB培养基，重悬菌体。空白对照用LB培养基。 OD600 0.6~0.8 即符合。 （4）用1.5 ml离心管，4℃ 8000×g 离心1min 收集菌体。 （5）用500 ul预冷的0.1 mol/L CaCl2 溶液洗涤菌体，4 ℃ 8000×g 离心1 min弃上清。 （6）加入500 ul 预冷的0.1 mol/L CaCl2，重悬菌体，冰上静置2 h，再次离心弃上清。 （7）加入200 ul 0.1 mol/L CaCl2溶液重悬菌体，加入5 ul质粒，对照组不加质粒，冰上静置30min。 （8）42℃热激90 s(严格控制)，立即冰上静置1~2min。 （9）加入400 ul 液体LB培养基，37 ℃ 180 rpm 振荡培养30 min~1hr。 （10）涂布含AMP 100 ug/ml LB平板，37 ℃、180 rpm培养过夜。 3.2.6 验证目的基因是否转化成功 挑取平板上的单菌落，接种于5ml新鲜液体LB培养基，37℃ 振摇培养过夜。用试剂盒提取质粒，将提取的质粒上样于0.8%的琼脂糖凝胶，电泳验证。 (责任编辑：qin) |