T7RNA聚合酶的合成与表达+文献综述(5)
时间:2017-05-17 22:00 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
T%=（a+b）/m×100； C%=b/（a+b）×100 式中 a—Acr的质量（g）； b—Bis的质量（g）； m—凝胶溶液总体积（ml）。 在此，a∶b（W/W）是关键；a∶b ＜10时，形成的凝胶脆、硬、呈乳白色；a∶b＞100时，即使5%的凝胶也呈糊状，易断裂。要制备透明而有弹性的凝胶，a∶b要控制在30左右。通常T = 2%~5%时，a∶b =20左右；T = 5%~10%时，a∶b =40左右；T = 15%~20%时，a∶b =125~200左右。T在3%~25%的范围内，凝胶易发生聚合。T=7.5%的胶称作标准凝胶。大多数生物体内的蛋白质在此凝胶中电泳能得到满意的结果。 2.5 体外传录 在DNA指导下RNA的合成称为转录，RNA链的转录起始于DNA模板的一个特定起点，并在另一个终点处终止。DNA双链在解旋酶的作用下将两条链局部分开，RNA聚合酶以其中一条链为有效的模板，在其上合成出互补的RNA链，DNA经转录后仍以全保留的方式（conservative mode）保持双螺旋结构，已合成的RNA链则离开DNA链[33]。 由研究知T7 RNA聚合酶能够特异性识别T7启动子，从而特异性地转录T7启动子后的DNA序列。因此本实验通过在DNA链上加上T7 启动子后通过T7 RNA聚合酶来实现所需RNA链的合成。由现代分子生物学知识可知，RNA转录的基本过程包括：模板识别、转录起始、通过启动子及转录的延伸和终止。具体过程为RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之相结合，在RNA聚合酶的催化作用下，以4种三磷酸核苷（NTPs）为原料，根据碱基配对原则（A-U，T-A，G-C） (责任编辑：qin) |