106-120 162。5±3。8 152。2±4。4
121-135 208。5±6。4 197。5±7。3
136-150 301。7±19。0 291。5±22。0
151-165 406。7±6。8 383。2±21。2
166-195 498。9±22。8 481。9±34。2
2。4 EPS提取和3D-EEM荧光光谱
EPS采用热提取法[14]。使用具有葡萄糖标准的蒽酮法测定多糖含量,并使用改进的Lowry法和牛血清白蛋白作为标准测定蛋白质浓度[15]。使用荧光分光光度计(F-4600型,日立有限公司,日本)测定荧光光谱。用随后的扫描发射光谱从200至600 nm以5 nm增量收集EEM光谱。激发和发射狭缝保持在10 nm处,并设置扫描速度为12000 nm/分钟。光电倍增管(PMT)的电压设定为500 V,用于低水平光检测。将双蒸馏水的光谱记录为空白。Origin 8。0软件用于处理EEM数据,每个EEM光谱的轮廓线表示荧光强度。
2。5 脱氢酶活性测定
程序如下:
(1) 取10 mL的污泥样品用10 mL的等渗盐溶液在3000 g条件下离心5 min;
(2) 取5 g均质湿污泥溶解于15 mL经高压灭菌的0。85%生理盐水;
(3) 取2 mL的污泥提取液中加入2 mL 5g L-1氯代三苯基四氮唑(TTC),1。5 mL 0。1M 三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液(pH =7。4),0。5 mL 0。36%Na2SO3;
(4) 混合溶液置于37±1 ℃ 黑暗环境中培养4 h;文献综述
(5) 向试管中滴加两滴浓硫酸以终止还原反应,加入5 mL甲苯提取红色还原产物三苯基甲月替(TF);
(6) 反应混合物在离心机6000 g离心5 min,取上层清液于486 nm紫外光谱测定吸光度;
(7) 取相同体积的污泥液进行测定,每个值TTC-DHA表示在单位l μg TF g-1 VSS h-1 ,每组三个平行样本。
2。6 血红素c萃取和测定
将5 mL anammox颗粒污泥在3000 g,4℃下离心5分钟,然后用磷酸钠缓冲液(10 mM,pH 7。5)洗涤两次。随后将洗涤的沉淀重悬于25 mL相同的缓冲液中,超声(800 W,4 ℃,20 min,超声处理器CPX 750,USA)破碎。并在4℃下离心(15,000g)15分钟分离细胞团。取上层清液,用 Berry 和 Trumpower 法测定血红素c含量[16]。血红素c的含量值表示为μmol g-1 VSS。