1。5研究依据。。。。9

1。6研究意义。。。 10

2 实验部分。。。。 11

   2。1仪器与试剂。 11

     2。2。1实验仪器。。。。 11

     2。2。2实验试剂。。。。 11

     2。2。3仪器工作条件 11

   2。2实验内容。。。 12

     2。2。1流动相的配置 12

     2。2。1样品溶解。。。。 12

     2。2。3样品预处理。。 12

     2。2。4样品的初步检测判断。。。。 13

      2。2。5分析及制备方法。。。 13

3  结果分析与讨论。 14

3。1粗肽MS图分析。。。 14

3。2最优洗脱梯度研究结果。。 15

3。3最佳分离流动相体系研究结果。 18

3。4制备色谱中最佳进样量的确定。 19

4  结论。。。。 21

参考文献。。 22

致谢。。 23

1 引言

1。1多肽的简介

1。1。1  多肽的定义与发展前景

在20世纪氨基酸被发现，它通过肽链连接在一起而形成肽( peptide )。

两个氨基酸分子脱水缩合形成二肽，多肽在自然界中广泛存在。多肽是与生物体内各种细胞功能相关联的生物活性物质。生物活性肽拥有免疫调节、酶调节、激素调节、抗病毒、抗氧化、降血脂和降血压等功能，可以作为药物或药物的前体的使用，且使用安全，人体对生物活性的多肽吸收速率比氨基酸高，多肽药物还可以治疗癌症、冠心病、糖尿病，贫血，心血管疾病，遗传病和病毒感染等疾病，越来越受人们的重视。 来自优Q尔W论E文R网wWw.YouERw.com 加QQ75201.8766

“据统计，目前多肽类药物的销售已占整个国际药物市场2%的份额，保持10%左右的增速，高于药物整体市场，市场规模近200美元，预计到2018年将达到254亿美元。”肽类药物的治疗作用涉及激素、神经、细胞生长、生殖、肿瘤病变、神经激素传递质及免疫调节等方面。虽然肽类药物能有效的治疗各类疑难杂症，但人们对其的研究还不深入，对其需求量又较大，所以多肽类药物的开发研究有着较大的增长空间。

1。1。2 多肽的合成方法

多肽合成方法总的可为固相合成和液相多肽两方法。固相合成一般从氨基酸C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。

现代的多肽合成法起源于上世纪六十年代，美国生物化学家Robert Bruce Merrifield于1962年首次利用固相合成法合成了二肽和四肽。在20世纪80年代初期，世界上出现了第一台真正意义上的多肽合成仪。Merrifield因发明多肽固相合成法，对发展新药物和遗传工程的重大贡献而获1984年诺贝尔化学奖。

肽键的形成属于氨基在羧基上的亲核反应，涉及到四面体的中间体。然而，在室温下，羧基与氨或胺的反应产物是铵盐并不是酰胺。因此，羧基组分（X-R2=OH）必须在肽键形成前活化。但肽缩合反应必须在温和的反应条件和室温下进行。

1。1。3 多肽的分离纯化方法

多肽合成一般采用固相合成法，属于非均相反应，容易产生较多相似的副产物，导致合成的多肽成分复杂，目标多肽浓度较低，目标多肽与杂质具有非常相似的理化性质，故多肽的分离纯化异常困难。伴随着科技的进步与发展，生物技术和多肽结构鉴定等方面也有了更加深入的进展，随之出现了很多的新型高效的分离方法和技术，如色谱、电泳、层析、膜、萃取等。综合实际和现代分离科学理论，发现色谱和电泳是目前分离技术中分离效果最好的两种方法。但是电泳有局限性，它仅能用于多肽的分离却不能用于多肽的制备。反相高效液相色谱(RP-HPLC)拥有分离效果好、分辨率高、回收率高等较多优点，在多肽的分离纯化和制备中备受青睐，因此，RPLC是目前分离纯化和制备多肽的主要手段。