取 1 个 10mL 容量瓶,用 5mL 移液管准确移取 5ml 麦冬果实色素提取溶液容量瓶中，于 正午 12 点时，分别于 0h、0。5h、1h、1。5h、2h、2。5h 每隔 30min 测其在波长 473nm 和 529nm 处的吸光度测定吸光度，平行测定三次。

2。3。5 金属离子对麦冬果色素稳定性的影响

取 4 个 10mL 容量瓶待用。分别加 4g 的 NaCl、KCl、CaCl2 、BaCl2 固体于 20mL 去离 子水中配置成溶液，取 2mL 装于容量瓶中，再在溶液中分别加入 5mL 麦冬果实色素提取液， 在波长 473nm 处和波长 529nm 处用紫外可见分光光度计，于 0h、0。5h、1h 时测定各个溶 液的吸光度，平行测定三次。

2。3。6 麦冬果色素溶液的稳定性表示方法[6]

吸光度变化百分数=(Ao－At)/A0×100%式中，Ao 为初始色素溶液的吸光度，At 为经过 t 时间后的吸光度。

2。4 麦冬果实色素的抗氧化活性分析

对抗氧化活性的研究从三方面分析：·OH 自由基的清除率的测定、超氧自由基的清除 率的测定、DPPH·自由基的清除率的测定。

2。4。1 超氧自由基的清除率的测定

2。4。1。1 原理

利用邻苯三酚自氧化反应测定自由基清除率对产生的超氧负离子自由基的清除作用。 邻苯三酚在弱碱性（Tris-HCl 缓冲溶液 pH 为 8。2）环境中自氧化分解产生 O -·自由基的 反应为：

邻苯三酚→O -·+其他产物

SOD 或类 SOD 之类的活性物质对 O -·自由基的歧化活性也通常用该体系来测定。随着反应 的不断进行，O2 ·自由基在体系中会不断的积累，从而导致反应开始后的一段时间之内，

反应液在 325nm 波长处的吸光度会随时间的变化而发生线性增大。因此在该段时间内且上 述波长处条件下，测定未加和加自由基清除剂，反应系统的吸收光谱分别为 A0 和 A。

2。4。1。2 溶液的配置来自优O尔P论R文T网WWw.YoueRw.com 加QQ7520`18766

Tris-HCl 缓冲溶液（pH=8。2）：取 6。25g Tris 试剂溶于蒸馏水中，加浓 HCl 2。00ml， 稀释定容至 250ml 容量瓶中，得 pH=8。2 的 Tris-HCl 缓冲溶液。

邻苯三酚溶液：称取 100。0mg 邻苯三酚于 25ml 容量瓶中，加入 80%乙醇使溶解并稀释 至刻度，得到 0。00300mol/L 邻苯三酚溶液。

2。4。1。3 超氧自由基的清除率的测定

用 5mL 移液管准确移取 4。50mL 配置好的 PH8。2 Tris-HCl 缓冲溶液于 10mL 容量瓶中， 再在容量瓶中加入 5。20mL 的去离子水，摇晃均匀，恒温水浴锅的温度设置为 25 摄氏度， 将容量瓶放置于水浴锅中恒温 20min，取出后迅速加入 0。30ml 的邻苯三酚溶液（浓度为 0。003mol/L），混合均匀后，以空白试剂作为参比溶液，每过 30s 在波长为 325nm 处测定 一次吸光度，直至吸光度数值与时间不再呈明显的线性关系为止。以时间 t 为横坐标，以 吸光度 A 的数值为纵坐标，作图，斜率为 K0。

再次准确移取 4。50mL 配置好的 PH8。2 Tris-HCl 缓冲溶液于容量瓶中，随后用移液管 分别移取 3。5mL、4mL、4。5mL、5mL 和 5。5mL 的麦冬果实蓝色素溶液，混合均匀后，放入 25℃恒温水浴锅中恒温 0。5h，取出后迅速加入 0。30mL 的邻苯三酚溶液（浓度为

0。003mol/L），摇匀，每隔 30s 在波长为 325nm 处测定一次吸光度，直至吸光度数值与时 间不再呈明显的线性关系为止。以时间 t 为横坐标，以吸光度 A 的数值为纵坐标，作图， 斜率分别为 K1、K2、K3、K4、K5。

各个样品超氧自由基的清除率计算公式为： 清除率（%）=（K0－K）/K0×100%（K 为 K1、K2、K3、K4、K5）

2。4。2 DPPH 自由基的清除率的测定